鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆与表达研究
王忠泽,荫俊,王威,白洁,侯晓军,宋伟,张松乐
北京微生物流行病研究所!北京,100071,北京微生物流行病研究所!北京,100071,北京微生物流行病研究所!北京,100071,白求恩医科大学第二临床医院,北京微生物流行病研究所!北京,100071,北京微生物流行病研究所!北京,100071,北京微生物流行病研究所!北京,100071
CLONING AND HIGH-LEVEL EXPRESSION OF Y.PESTIS LCRV GENE IN E.COLI
摘要 目的 研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法 采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组质粒 pBV/LcrV ,进行温控诱导表达。 结果 ( 1)获得长约 980bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知LcrV序列相同。( 2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 3 8× 10 3处有表达条带。 ( 3 )经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 3 8.4 %。 ( 4 )表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于上清中。结论 获得了LcrV基因 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达产物主要以可溶状态存在。
关键词 ：
鼠疫耶尔森氏菌 ,
基因克隆 ,
测序 ,
基因表达 ,
LcrV基因
Abstract ：Aim To study the biology activity of the protective antigen V protein and the pathogenesis of Y.pestis Methods LcrV gene fragment was amplified from Y.pestis strain through PCR.The fragment was identified and cloned into prokaryotic expression vector pBV220 and constructed recombinant plasmid pBV/LcrV.And then temperature regulated inducement expression was used to express LcrV.Results (1)A about 980bp length PCR product was obtain and the sequence was the same as known LcrV gene sequence.(2)The expression product was detected by SDS-PAGE and an expression band about 38×10 3 MW was found.(3) The aim protein representing 38.4% of total cell protein by scanning map analysis (4)Most of the aim protein is in supernatant after ultrasonic crash.Conclusions We obtained LcrV gene and expressed it in Escherichia coli.Most of the expressed product was soluble.
Key words ：
Yersinia pestis
Gene clone
Sequencing
Gene expression
LcrV gene
收稿日期: 2001-05-20
1.UneT ,BrubakerRR .RolesofVantigeninpromotingvirulenceandimmunityinYersiniae〔J〕.J.Immun.1984,133,4:2226～2230.
2.AusubelFM ,BrentR ,KingstonRE ,etal.精编分子生物学实验指南〔M〕.北京:科学出版社,1998.23.
3.J.Sambrook,E .F .Fritsch,T .Maniatis.分子克隆实验指南〔M〕.北京:科学出版社,1992.10.
4.AndersonGWJr,LearySE ,WilliamsonED ,etal.RecombinantVantigenprotectsmiceagainstpneumonicandbubonicplaguecausedbyF1-capsule-positiveand-negativestrainsofYersiniapestis〔J〕.InfectImmun,1996,64:11,4580～4585.
5.PullenJK ,AndersonGWJr,WelkosSL ,etal.AnalysisoftheYersiniapestisVproteinforthepresenceoflinearantibodyepitopes〔J〕.InfectImmun,1998,66:2,521～527.
6.PriceSB ,LeungKY ,BarveSS ,etal.MolecularanalysisoflcrGVH ,theVantigenoperonofYersiniapestis〔J〕.JBacteriol,1989,171:5646～5653.
7.张智清,姚立红,侯云德.含PRPL 启动子的原核高效表达载体的组建及其应用〔J〕.病毒学报,1990,6:111.
[1]
陈瑶瑶, 赵晓南, 孙艳红, 张美玲, 周洁楠. 云南省1株基孔肯雅毒株全基因组序列测定及特征分析
[2]
戴琰, 罗雪莲, 杨晶, 朱文涛, 濮吉, 卢珊, 熊衍文, 徐建国. 青藏高原藏羚羊粪便携带小双节RNA病毒调查分析的研究
[3]
杨梦, 王鹏, 袁辉, 刘晓青, 周海健, 徐晓倩, 熊长辉, 黄星魁, 谢昀, 潘欢弘. 江西省部分地区鼠形动物中巴尔通体分布及基因组序列研究
[4]
熊雨菡, 李智颖, 卢楠, 陈俊伊, 唐佳玲, 徐蕾, 杨春, 何永林. RseA基因影响耻垢分枝杆菌药物敏感性的生物信息学分析与初步验证
[5]
汪敏, 杨爱平, 陈燕, 胡萍芳, 严杰. 引起儿童呼吸道感染的优势肠道病毒及其血清型和流行特征分析
[6]
韩阿祥, 康雨童, 丰新倩, 谢旦立, 关万春, 楼永良. 基于高通量测序分析入境羊毛微生物群落结构特征
[7]
苏文哲,曾庆,蒋力云,曹毅敏,李意兰,陈宗遒,朱娉婷,景钦隆,狄飚,胡玉山,张周斌. 广州市2018年输入性登革病毒4型全基因组序列特征分析
[8]
刘倩, 宋文涛, 樊国印, 熊衍文, 陈海婴, 吴葵. 高通量测序在鸟类肠道微生物中的研究进展
[9]
杨晓雯, 韩秀瑞, 朴东日, 赵鸿雁, 田国忠, 姜海. 一株羊种变异布鲁氏菌分离株遗传特征分析
[10]
唐媚娜, 何伟, 肖卫红, 熊银, 饶亚华, 胡志敏. 基于RNA-seq分析戊型肝炎病毒感染HepG2 细胞后的差异表达基因
[11]
俞骅, 董华丽, 汪皓秋, 楼秀芹, 刘涛, 张蔚, 王旭初, 潘劲草. 杭州地区相同分子型别的单核细胞增生李斯特菌临床和食品分离株基因组分析
[12]
梁昊, 顾一心, 周贵兰, 张建中, 张茂俊. 空肠弯曲菌VI型分泌系统结构特征和菌株中分布
[13]
王姝懿, 赵学亮, 孙柯, 呼和巴特尔, 王文龙. 布鲁氏菌A19疫苗株全基因组测序及比较基因组学分析
[14]
张拥军, 严延生. 人类病毒组及研究进展
[15]
张改, 李振江, 靳静, 王书伟, 陈松建, 李亚辉, 黄德海, 王小亭, 王山梅, 王中全. 沙雷菌裂解性噬菌体PS2生物学特性及其全基因组测序
