多重PCR方法检测EHEC和EPEC毒力基因
潘劲草,邵浙新,黄志成,孟冬梅
杭州市疾病预防和控制中心!杭州,310006,浙江大学医学院诊断学教研室,杭州市疾病预防和控制中心!杭州,310006,杭州市疾病预防和控制中心!杭州,310006
VIRULENCE GENES DETECTION OF ENTEROHEMORRRHAGIC ESCHERICHIA COLI AND ENTEROPATHGENIC E COLI STRAINS WITH MULTIPLEX PCR ASSAY
摘要 目的 建立简易实用的检测EHEC和EPEC多种毒力基因的方法。方法 应用多重PCR同时检测大肠埃希菌菌株的stx1、stx2、EPEC和EHEC共同的eaeA(eaeA -gen)等靶基因 ;用常规PCR检测EHECO15 7特异的eaeA(eaeA -O15 7)基因 ,以区分EHEC和EPEC的eaeA基因。结果 对分别分离自美国和我国江苏的EHECO15 7菌株以MPCR检测 ,stx1、stx2和eaeA -gen基因均阳性 ,同时常规PCR扩增eaeA -O15 7也阳性。在 8株分离自杭州的志贺毒素阴性的大肠埃希菌O15 7菌株中 ,stx1、stx2和eaeA -O15 7基因均阴性 ,仅 2株扩增出EPECeaeA基因。在 2 8株EPEC血清型、12株ETEC血清型、12株EIEC血清型大肠埃希菌菌株中 ,stx1和stx2基因均阴性 ;3株EPEC血清型菌株eaeA - gen基因阳性。结论 MPCR技术可同时检测菌株的stx1、stx2和eaeA基因 ,可为EHEC和EPEC感染的诊断及流行病学调查 ,提供一种简便、实用、经济的技术手段
关键词 :
大肠埃希菌 ,
毒力基因 ,
聚合酶链反应
Abstract :Aim To develop a simple, efficient method for determining the virulence trait of enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) and enteropathogenic E. coli (EPEC). Methods Virulence genes, including stx1, stx2, EPEC and EHEC general eaeA fragment (eaeA-gen), were amplified by multiplex PCR in E. coli strains.In order to distinguish EHEC eaeA from EPEC eaeA, another PCR was used to amplify EHEC O157 specific eaeA fragment (eaeA-O157). Results In EHEC O157∶H7 strain 933 and 88-2364,isolated from US and Jiangsu in China respectively, stx1, stx2, eaeA-gen and eaeA-O157 genes were all found by the multiplex PCR. In 8 strains of nontoxinogenic E. coli O157 isolated from Hangzhou, there was no stx1, stx2, or eaeA-O157 genes, except 2 strains isolated from diarrhea patients showed EPEC eaeA gene positive. Of all 28 E. coli strains with EPEC O serotype which were showed both of the stx1 and stx2 negative, 3 were EPEC eaeA gene positive. Neither EHEC nor EPEC virulence gene was found in all tested E. coli strains with ETEC and EIEC O serotypes.Conclusion The multiplex PCR can be used to detect stx1, stx2, and eaeA genes at the same time.
Key words :
Escherichia coli
stx
eaeA
收稿日期: 2001-01-20
1 rskovFandI rskov .Escherichiacoliserotypinganddiseaseinmanandanimals〔J〕 CanJMicrobiol,1992 ,38:6 99.
2 泉谷秀昌 ,渡边治雄 肠管出血性大肠菌 (EHEC/VTEC)における病原因子の分子生物学的研究の进步〔J〕 日本临床 ,1997,3 :6 41.
3 YuJandJKaper .Cloningandcharacterizationoftheeaegeneofen terohaemorrhagicEscherichiacoliO15 7:H7〔J〕 MolMicrobiol,1992 ,6 :411.
4 LouieM ,JDeAzavedo ,RClarke ,etal.Sequenceheterogeneityoftheeaegeneanddetectionofverotoxin -producingEscherichiacoliusingserotype-specificprimers〔J〕 EpidemiolInfect,1994,112 :449.
5 权太淑 ,徐建国 ,范天锐 ,等 首次从出血性肠炎病人中分离出O15 7:H7大肠杆菌〔J〕 中华流行病学杂志 ,1988,9(特 4) :2 4~2 8.
6 潘劲草 ,孟冬梅 ,黄诚孝 ,等 大肠杆菌O15 7的致病性 :1例大肠杆菌O15 7:NM和副溶血性弧菌的重叠感染〔J〕 中国人兽共患病杂志 ,1999,15 (5 ) :6 4.
7 黄志成 ,许 珂 ,孟冬梅 ,等 .大肠杆菌O15 7分离株的生物学特性分析〔J〕 中国公共卫生学报 ,1999,18(4) :2 46 .
8 GannonVRJ,RKKing ,JYKim ,etal.RapidandsensitivemethodfordetectionofShiga -liketoxin -producingEscherichiacoliingroundbeefusingthepolymerasechainreaction〔J〕 ApplEnvironMicrobiol,1992 ,5 8:380 9.
9 GannonVRJ ,MRashed ,RKKing ,etal.Detectionandcharacteri zationoftheeaegeneofShiga -liketoxin -producingEscherichiacoliusingpolymerasechainreaction〔J〕 JClinMicrobiol,1993,31:12 6 8.
10 SchmidtH ,HRssmann ,andHKarch .VirulencedeterminantsinnontoxinogenicEscherichiacoliO15 7strainsthatcauseinfantiledi arrhea〔J〕 InfectImmun ,1993,6 1:4894.
11 DonnenbergMSandJBKaper .EnteropathogenicEscherichiacoli〔J〕 InfectImmun ,1992 ,6 0 :395 3 .
12 McDanielTK ,KGJarvis,MSDonnenberg ,etal.Ageneticlocusofenterocyteeffacementconservedamongdiverseenterobacterialpathogens〔J〕 ProcNatlAcadSciUSA ,1995 ,92 :16 6 4.
13 孟冬梅 ,潘劲草 ,斯国静 .杭州市腹泻患者肠致病性大肠杆菌感染的流行病学调查〔J〕 浙江预防医学 ,2 0 0 0 ,12 (4) :6 .
14 李 怡 ,徐建国 .肠出血性大肠埃希菌的多重PCR检测方法 ,中华微生物学和免疫学杂志〔J〕 1999,19(1) :81.
15 王新为 ,李君文 ,宋 农 ,等 .大肠杆菌O15 7:H7分子生物学检测方法的研究 ,中国公共卫生〔J〕 1999,15 (10 ) :932 .
[1]
廖虹瑜, 李文博, 何树森, 罗隆泽, 曾林子. 2006-2017年四川省临床分离猪链球菌2型的病原学特征 [J]. 中国人兽共患病学报, 2021, 37(4): 306-310.
[2]
张爽, 张巍巍, 李颖, 马红梅, 冯宝立, 张茂俊, 陈倩, 王丽丽. 一起由产气荚膜梭菌和肠聚集性大肠埃希菌共感染导致的聚集性腹泻事件病原学分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2021, 37(2): 183-187.
[3]
傅芬蕊, 张娅, 潘玉红, 曹颖平, 郑培烝. 产新德里金属β-内酰胺酶大肠埃希菌耐碳青霉烯类药物相关机制研究和分子分型 [J]. 中国人兽共患病学报, 2021, 37(1): 53-59.
[4]
王丽丽, 张寻, 段然, 陆峥, 魏东, 陈倩. 北京市市售生禽肉及社区居民冰箱耶尔森菌污染状况及分子特征研究 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(9): 752-757.
[5]
蒋华英, 甘霖, 毛盼, 宋泽萱, 纪顺师, 王怡倩, 王艳, 徐保红, 高伟利, 陈峥宏, 叶长芸. 奶牛粪便分离的伊氏李斯特菌伊氏亚种基因组序列测定及其分子特征分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(8): 624-630.
[6]
贺子翔, 夏昕, 覃玉芳, 杨浩, 覃迪, 向星宇, 胡俊忠, 湛志飞. 湖南省首例猪链球菌14型人源分离株鉴定及毒力基因分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(8): 631-635.
[7]
于晶峰, 桂峥, 武琳, 杨晓野, 王瑞, 木兰. 细粒棘球蚴线粒体nad 1基因的克隆与序列分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(7): 534-538.
[8]
徐建敏, 侯水平, 张晶, 陶霞, 白志军, 吴新伟, 周勇. 广州市鼠形动物肠道产ESBL大肠埃希菌分布及病原特征分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(7): 561-565.
[9]
杨梦, 王鹏, 袁辉, 刘晓青, 徐晓倩, 熊长辉, 黄星魁, 段然, 王鑫. 江西省猪和啮齿动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(7): 544-548.
[10]
李婉芬, 王璐, 谢咏琳, 方琳, 毛文慧, 林倩琦, 林健邦, 王宝珍. 澳门地区鸡源性产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌基因型检测 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(7): 578-582.
[11]
黄银燕,温圆圆,刘伟,程庆林,吴亦斐,贾庆军,谢立. 杭州市儿童猩红热病原学及其相关血链球菌毒力基因分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(3): 218-222.
[12]
孟昭倩, 段然, 吕东月, 郭国侠, 郭靓子, 卜戈. 2014-2019年阜阳市食品和病人分离单增李斯特菌的分子特征分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2020, 36(12): 1019-1024.
[13]
李佳康, 黄雪琳, 曾杭, 杨蕾, 巫梦雨, 雪妍, 申玉玺, 黄勇, 邹立扣, 韩新锋. 成都地区肉鸭屠宰链弯曲菌毒力基因分布及分子分型研究 [J]. 中国人兽共患病学报, 2019, 35(9): 815-820.
[14]
张慧娟, 张恩民, 贺金荣, 李伟, 魏建春. 蜡样芽胞杆菌在不同标本中的毒力基因分布特征 [J]. 中国人兽共患病学报, 2019, 35(8): 683-687.
[15]
俞骅, 董华丽, 汪皓秋, 楼秀芹, 刘涛, 张蔚, 王旭初, 潘劲草. 杭州地区相同分子型别的单核细胞增生李斯特菌临床和食品分离株基因组分析 [J]. 中国人兽共患病学报, 2019, 35(8): 699-705.