白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株基因组中CYP6基因片段的分离与鉴定
周国理,黄炯烈,姚其方,詹希美,葛春喜,王玲中
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ISOLATION AND IDENTIFICATION OF A FRAGMENT OF CYP6 GENE FROM DELTAMETHRIN-RESISTANT STRAIN GENOME OF AEDES ALBOPICTUS
摘要 目的 获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6 基因家族中某个成员的一个基因片段。方法 根据家蝇CYP6A1、CYP6D1 以及致倦库蚊CYP6E1 同源区氨基酸序列,设计1 对简并引物,进行PCR,获得一与设计的细胞色素P450 基因片段大小相符合的基因片段。将该片段与pUC19 质粒重组,并克隆至JM109 大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。结果 获得了1 条长248bp 的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6 家族的同源性在34-2 % ~44-3% 之间,而与CYP4 家族同源性较低,与CYP4C1 、CYP4D1、CYP4D2 同源性分别为22-1% 、29-5 % 和27-6 % ;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。结论 该序列为CYP6 家族中某一成员的基因片段。
关键词 :
白纹伊蚊 ,
CYP6 ,
抗药性 ,
同源性分析 ,
系统树
Abstract :Aim To obtain a fragment of CYP6 gene from deltamethrin-resistant strain of Aedes albopictus Method A pair of degenerate primers according to the homologus amino acid sequences of CYP6A1,CYP6D1 in Musca domestica and CYP6E1 in Culex quinquefasciatus was designed and used to amplify CYP6 gene from genomic DNA of deltamethrin-resistant strain of Ae albopictus by PCR technique A DNA fragment sized as designed was obtained The fragment was recombinated with pUC19,and cloned into JM109 A positive clone was selected to sequence Homologous analysis on the deduced amino acid sequence was executed A dendrogram was constructed by the use of PC/GENE sequence analysis software Results A nucleotide sequence of 248bp was obtained The cloned sequence identity to members of CYP6 is from 34 2% to 44 3%,to CYP4C1,CYP4D1 and CYP4D2 is 22 1%,29 5% and 27 6% respectively The constructed dendrogram showed a similar result to homologous analysis Conclusion The cloned sequence is a gene fragment from one of members of CYP6 family
Key words :
Aedes albopictus
CYP6
Insecticide resistance
Homologous analysis
Dendrogram
收稿日期: 2000-01-20
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