天蚕素多肽分子对大肠埃希菌的抑制作用
王炜,任伟宏
河南中医学院第一附属医院
Inhibition of Escherichia coli growth by Cecropin A
摘要 目的 体外重组表达家蝇天蚕素成熟肽分子,观察其对临床分离的多重耐药大肠埃希菌（E.coli）体外抑制作用。方法 PCR克隆天蚕素成熟肽（Mature Cecropin，MC）基因，在MC基因前加入色氨酸密码子（TGG）连接于pET32a质粒的硫氧还蛋白基因后，构建重组质粒pET32a-MC。转化E.coli/BL21（DE3）中。IPTG诱导重组融合蛋白质Thioredoxin(硫氧还蛋白，Trx)-MC表达。融合蛋白质纯化后，经胃蛋白酶37℃水解。融合蛋白质中的天蚕素氨基酸序列具有抗胃蛋白酶能力不被水解，融合蛋白质其余部分被胃蛋白酶水解成小于2kD的碎片，使用透析袋分离、纯化、浓缩，获得天蚕素成熟肽分子。水解产物经Tricine-SDS-PAGE验证，获得一条与天蚕素分子大小相近的条带。采用液态生长抑制试验检验天蚕素分子对E.coli抑制作用，观察其对标准菌株ATCC 25922及临床分离多重耐药菌株的抑制活性。结果 MC成熟肽分子体外对E.coli标准菌株的抑制活性较强，标准菌株较多重耐药菌株受抑制得更快，但两者均能被天蚕素分子抑制。结论 天蚕素多肽分子对E.coli多重耐药菌株具有抑制作用。
关键词 ：
天蚕素 ,
伴侣分子 ,
融合表达 ,
抑菌试验 ,
多重耐药菌 ,
Musca domestica ,
Cecropin ,
molecular partner ,
Fusion expression ,
Multiple drug resistant
Abstract ：Abstract: Objective Expression cecropin A from the Musca domestica and identification of its activity in vitro .Methods Cloning housefly cecropin mature peptide gene, and to construct pET32a-mc plasmid . The plasmid pET32a-mc was transformed into BL21(DE3) to express the recombinant protein after the induction of IPTG. The Trx&MC fusion protein was purified. To digest Trx&MC fusion protein by pepsin. To Detect antibacterial activity of MC by liquid growth inhibition. Results MC molecules has the same activity in vitro on standard strains and multiple drug-resistant strains of E.coli. Conclusion Multiple drug-resistant（MDR）E.coli was inhibitory by MC molecules. MC molecules was an obvious choice to substitute with traditional antibiotics.
收稿日期: 2012-08-13
出版日期: 2013-06-20
通讯作者:
任伟宏
E-mail: king_william@yahoo.com
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