一种汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
刘师文, 熊英, 施勇, 李健雄, 王倩, 龚甜
江西省疾病预防控制中心,南昌 330029
A duplex quantitative real-time RT-PCR assay for the identification of Hantaan and Seoul viruses
LIU Shi-wen, XIONG Ying, SHI Yong, LI Jian-xiong, WANG Qian, GONG Tian
Jiangxi Center for Disease Control and Prevention, Nanchang 330029, China
摘要 目的 建立一种汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)和汉城病毒(Seoul virus,SEOV)双重实时定量荧光RT-PCR检测方法。方法 根据HTNV和SEOV S基因设计引物和探针、优化反应条件,建立2种汉坦病毒的双重实时荧光定量RT-PCR方法。以甲型流感病毒、登革热病毒、新布尼亚病毒、寨卡病毒、新冠病毒阳性核酸为模板验证方法的特异性,将建立的方法与巢氏RT-PCR比较,确定方法对临床样本的适用性。结果 建立了一种HTNV和SEOV 双重实时定量荧光RT-PCR检测方法,该方法对2种型别病毒的最低检测限均为10 copies/μL,不同浓度标准品Ct 值批内和批间差异均小于2%。与登革热病毒、新布尼亚病毒、寨卡病毒、新型冠状病毒、甲型流感病毒均无交叉反应。对10份肾综合征出血热急性期血清样本进行检测,结果9份为HTNV、1份为SEOV,与巢式RT-PCR方法结果一致。结论 建立的双重实时荧光定量RT-PCR方法可以快速对HTNV和SEOV 进行分型和定量检测,适用于肾综合征出血热临床早期诊断。
关键词 :
汉滩病毒 ,
汉城病毒 ,
双重实时荧光定量RT-PCR
Abstract :To establish a duplex quantitative real-time RT-PCR assay, specific primers and probes were designed using the S gene of Hantaan virus (HTNV) and Seoul virus (SEOV). The real-time RT-PCR reaction conditions were optimized and the sensitivity, specificity, and stability of the method were evaluated. The sensitivity of the method for simultaneous quantitative amplification was 10 copies/μL. The coefficient of variation for both intra- and inter-assays was less than 2%. No cross-reactivity was detected with influenza A virus, dengue virus, severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, Zika virus, or SARS-Cov-2. Ten serum samples from HFRS patients were analyzed by this assay and the results showed that nine were HTNVs and one was SEOV, which was consistent with the nested RT-PCR method. Thus, the assay developed in this study was able to detect HTNV and SEOV with good specificity and sensitivity and may become a powerful diagnostic tool, especially in the early stage of HTNV and SEOV infections.
Key words :
Hantaan virus
Seoul virus
duplex quantitative real-time RT-PCR
收稿日期: 2020-10-27
基金资助: 江西省科技计划项目重点研发计划(No.20202BBGL73052)
通讯作者:
龚甜,Email:gong_tian0203048@163.com; ORCID:0000-0002-3069-0845
引用本文:
刘师文, 熊英, 施勇, 李健雄, 王倩, 龚甜. 一种汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 中国人兽共患病学报, 2021, 37(6): 478-483.
LIU Shi-wen, XIONG Ying, SHI Yong, LI Jian-xiong, WANG Qian, GONG Tian. A duplex quantitative real-time RT-PCR assay for the identification of Hantaan and Seoul viruses. Chinese Journal of Zoonoses, 2021, 37(6): 478-483.
链接本文:
http://www.rsghb.cn/CN/10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.067 或 http://www.rsghb.cn/CN/Y2021/V37/I6/478
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