%A 赵亚男, 曾德新, 郭德华, 蒋原, 蒋鲁岩, 李鑫妮, 陈伟, 汤芳, 薛峰, 戴建君 %T 一种快速鉴别牛肉中大肠杆菌O157∶H7检测方法的建立及应用 %0 Journal Article %D 2020 %J 中国人兽共患病学报 %R 10.3969/j.issn.1002-2694.2020.00.036 %P 272-279 %V 36 %N 4 %U {http://www.rsghb.cn/CN/abstract/article_24546.shtml} %8 2020-04-20 %X 目的 建立一种快速、准确检测牛肉中大肠杆菌O157∶H7的方法。方法 利用抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体2G5(捕获抗体),酶标单克隆抗体2E3(HRP-2E3,检测抗体),建立可用于检测大肠杆菌O157∶H7的双抗体夹心ELISA方法,同时对反应条件进行优化并对该方法进行评价。 结果 通过优化得到最佳反应条件,单克隆抗体2G5最佳包被浓度为4.48 μg/mL,HRP-2E3最佳检测浓度为19.9 μg/mL。该方法对纯培养菌液最低检出限为 1×105 CFU/mL,具有良好的敏感性,且特异性良好,与其他大肠杆菌、沙门氏菌、李斯特菌等均无交叉反应。板内及板间变异系数均小于7%,具有较高的精密度。人工污染牛肉样品增菌8 h后,对大肠杆菌O157∶H7的检出限为1 CFU/25 g。结论 建立的双抗体夹心ELISA检测方法灵敏度、准确度、重复性良好,特异性强,可用于临床实际样品检测。