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文章快速检索     高级检索 中国人兽共患病学报   2013年 29卷 10期 刊出日期：2013-10-15 论著 实验研究 综述 调查防治     论著 941 贾引军,熊小路,王锡乐,齐 永,焦 俊,段长松,龚文平,温博海 普氏立克次体重组表面蛋白制备和免疫印迹抗原特异性分析 目的 克隆与表达普氏立克次体(Rickettesia prowazekii)主要蛋白抗原基因,分析所表达重组蛋白的抗原特异性。方法 采用PCR法从普氏立克次体全基因组中扩增其主要抗原基因,将扩得的基因片段插入原核表达质粒;将基因重组表达质粒转化大肠杆菌,用IPTG诱导转化菌表达重组蛋白。将普氏立克次体、莫氏立克次体、立氏立克次体、恙虫病东方体、黑龙江立克次体、贝氏柯克斯体等实验感染小鼠血清与重组蛋白做免疫印迹。结果 经过PCR扩增后获得9个目的基因片段,用其构建出9个原核表达质粒;9个原核表达质粒转化菌均高效表达出相应的重组蛋白;结果显示FtsZ、GroEL、Rp828、EF-Ts等4个蛋白特异性最好,仅与普氏立克次体感染小鼠血清反应;其次是Omp,它除与普氏立克次体感染小鼠血清反应外,仅与莫氏立克次体感染血清反应。结论 FtsZ等4个重组蛋白为普氏立克次体的特异性抗原,可以作为研制流行性斑疹伤寒血清学诊断试剂的候选抗原。 2013 Vol. 29 (10): 941-945 [摘要] ( 506 ) [HTML 1KB] [PDF 674KB] ( 1113 ) 946 邢晓会,赵 翔,李希妍,成艳辉,谭敏菊,郭俊峰,黄维娟,隗合江,曾晓旭,王大燕,舒跃龙 全球B型流感病毒耐药相关突变株NA和HA序列特征分析 目的 研究全球B型流感耐药相关突变株的NA和HA序列特征及分子结构特点。方法 对我国2008-2012年B型流感病毒进行序列测定和分析,确定耐药相关突变株,进一步利用MEGA5.0软件分析我国与全球其他国家B型流感病毒的耐药相关突变位点和伴随位点的异同,并构建系统进化树,利用RasWin软件在NA、HA蛋白分子模型中展示突变位点。结果 我国2008-2012年共发现6株B型流感病毒耐药相关突变株,其携带的NA、HA伴随突变较少,且与国外B型耐药相关突变株的NA、HA序列处于不同的进化分枝上。 结论 目前发现的B型耐药相关突变株的突变位点多种多样,且我国的B型流感病毒耐药情况与国际情况并不十分一致,这提示加强我国乃至全球B型流感病毒耐药监测的重要性。 2013 Vol. 29 (10): 946-950 [摘要] ( 544 ) [HTML 1KB] [PDF 1025KB] ( 1118 ) 951 张克山,刘永杰,孔汉金,尚佑军,刘湘涛 羊口疮病毒B2L基因DNA疫苗载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达 目的 为构建羊传染性脓疱病毒(ORFV)B2L基因真核表达质粒并验证B2L基因在BHK-21细胞中的表达及表达的稳定性。方法 以ORFV主要免疫原性基因B2L为目标,以pVAX1为表达载体,构建重组真核表达质粒pVAX1-B2L,鉴定正确后转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过间接免疫荧光试验(IFA)验证B2L基因表达。结果 扩增出目的片段经序列测定和分析证明为ORFV B2L基因,经双酶切鉴定和序列测定分析证明了pVAX1-B2L质粒的正确性,IFA证实目的基因在BHK-21细胞中能够瞬时表达。结论 为进一步研制基于羊口疮病毒B2L基因的DNA疫苗奠定了基础。 2013 Vol. 29 (10): 951-954 [摘要] ( 648 ) [HTML 1KB] [PDF 565KB] ( 1087 ) 955 王艳冬,宫雅楠,肖 迪,张建中 幽门螺杆菌CagV蛋白的克隆表达及初步分析 目的 构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori) IV型分泌系统cagV(hp0530)基因的原核表达系统,表达并纯化CagV蛋白,初步分析其结构和抗原性,为进一步研究幽门螺杆菌的致病机制和治疗药物的筛选奠定基础。方法 以H.pylori ATCC700392株基因组为模板,采用聚合酶链反应(PCR)扩增获得目的片段,将其插入表达载体pET28a后转化大肠杆菌BL21(DE3),表达纯化后利用蛋白质印迹(Western blot)分析CagV蛋白的抗原性。结果 双酶切鉴定结果证实cagV基因重组表达载体构建成功;重组表达蛋白经飞行质谱鉴定为幽门螺杆菌CagV蛋白;Western blot检测结果显示CagV蛋白具有特异抗原性。结论 所克隆表达的CagV蛋白具有较好的抗原性,对后续的的H.pylori致病性和检测、分析研究有比较重要的意义。 2013 Vol. 29 (10): 955-958 [摘要] ( 878 ) [HTML 1KB] [PDF 964KB] ( 1122 ) 959 陈 霞,刘玉庆,李文革,刘 佳,李 娟 山东省猪源肠球菌酰胺醇类药物耐药表型及耐药机制研究 目的 调查山东省猪源肠球菌的分离情况,对酰胺醇类药物敏感性及相关耐药机制,探究引起肠球菌酰胺醇类耐药的可能机制。方法 应用肠球菌选择培养基进行肠球菌分离,16SrDNA序列扩增进行肠球菌种属鉴定,从采集自山东省44份猪粪便样本中分离得到肠球菌,应用微量肉汤稀释对其进行酰胺醇类药物耐药性研究,并利用普通PCR方法对常见的9种可水平移动的酰胺醇类耐药基因进行检测。结果 共分离得到34株肠球菌(分离率77.3%),发现分别有21株(61.8%)和25株(73.5%)的分离株对氯霉素和氟苯尼考耐药。耐药菌株中存在可水平传播的酰胺醇类耐药基因catA7(11株),catA8(2株),fexA(7株),fexB(5株),cfr(3株)。7株肠球菌同时存在两种不同的酰胺醇类耐药基因。结论 本研究中猪源肠球菌分离率较高,对酰胺醇类药物有很高的耐药性,分离株中存在的可水平移动的酰胺醇类耐药基因可能参与了受试菌株对酰胺醇类药物的耐药性。提示应加强畜牧兽医临床酰胺醇类耐药肠球菌的监测、检测工作,为了解我国动物源肠球菌耐药性现状,防控耐药肠球菌的传播和流行提供基础数据。 2013 Vol. 29 (10): 959-964 [摘要] ( 601 ) [HTML 1KB] [PDF 715KB] ( 1215 ) 实验研究 965 唐泰山,赵林立,廉慧峰,张常印,陈国强,姜 焱,祝长青,王凯民 布氏杆菌表面特异性多表位抗原的串联表达与免疫磁珠的初步建立 目的为获得布氏杆菌表面多表位抗原的特异性抗体,用于布氏杆菌免疫磁珠的构建。方法 从布氏杆菌3个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段并插入原核表达载体,转化至E. coli BL21(DE3),获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,IPTG诱导后表达出30 kDa的重组蛋白,亲和层析纯化后将其进行Western blot分析、间接ELISA鉴定和兔免疫试验,制备的抗血清经亲和层析纯化后,包被成免疫磁珠并用于布氏杆菌富集。结果 表达的重组蛋白能与牛抗布氏杆菌血清反应,其抗血清与布氏杆菌发生良好反应,纯化抗体包被的免疫磁珠能特异性吸附布氏杆菌。结论 获得的布氏杆菌特异性抗体和免疫磁珠具有良好的应用前景。 2013 Vol. 29 (10): 965-971 [摘要] ( 613 ) [HTML 1KB] [PDF 369KB] ( 1120 ) 972 田 芳,胡雪莉,杨维平,钱 莉,魏 慧,刘 浩,潘兴元,季明春 日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导B10细胞产生的研究 目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)与成虫抗原(SWAP)是否能够诱导小鼠调节性B细胞的产生。方法 SEA、SWAP和脂多糖(LPS)分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和磁珠分选后的脾脏CD19+B细胞,72 h后用流式细胞术分别检测CD19+IL-10+细胞比例,和细胞表面CD80、CD86及CD40的表达,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平。体内实验用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,1次/周,共3次,末次免疫后7 d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19+IL-10+细胞比例,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平。结果 LPS与SEA体外均能显著诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-10+细胞,两者无显著差异,而SWAP组不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-10+细胞;SEA与LPS能够诱导脾脏CD19+B细胞表面高表达CD80、CD86和CD40,而SWAP不能诱导脾脏CD19+B细胞活化;SEA与LPS诱导脾脏CD19+B细胞分化为IL-10+细胞的比例也显著升高,同时能刺激脾脏CD19+B细胞分泌高水平的IL-10,两者无显著差异;而SWAP不能诱导小鼠脾脏CD19+B细胞分化为IL-10+细胞并分泌IL-10。SEA体内免疫小鼠后,小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-10+细胞比例显著升高,并且能够分泌高水平的IL-10,而SWAP和PBS免疫组均不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+IL-10+细胞并分泌IL-10。结论 SEA体外体内均能诱导小鼠产生分泌IL-10的B10细胞,并且在体外不依赖于脾脏其他免疫细胞的参与,而SWAP体外体内均不能诱导B10细胞的产生。 2013 Vol. 29 (10): 972-976 [摘要] ( 533 ) [HTML 1KB] [PDF 1280KB] ( 1045 ) 977 周必英,周 泠,刘美辰,刘 晖,张 曦 猪带绦虫TSOL18基因的表达、纯化和兔抗血清的制备 目的 构建猪带绦虫重组质粒pGEX-TSOL18,表达纯化TSOL18重组蛋白,制备兔抗重组蛋白血清。方法 全基因合成猪带绦虫TSOL18抗原编码基因,定向克隆到pGEX-1λT表达载体,构建重组质粒pGEX-TSOL18;转化大肠埃希菌ArcticExpress(DE3), IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达情况;亲和层析纯化获得重组蛋白,免疫兔制备抗血清;ELISA测定抗血清的效价,Western blot鉴定抗血清的特异性。结果 全基因扩增出393 bp的TSOL18抗原编码基因,酶切和测序鉴定证实TSOL18基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达重组蛋白相对分子质量(Mr)约为41 kDa,经亲和层析后可获得纯度为75%的重组蛋白;ELISA测定抗血清的效价为1∶256 000,Western blot证实该抗血清能与重组蛋白发生特异性反应。结论 猪带绦虫TSOL18基因能在大肠埃希菌中高效表达,成功制备了高纯度的TSOL18重组蛋白和高滴度的兔抗重组蛋白血清,为猪带绦虫的疫苗研制奠定了基础。 2013 Vol. 29 (10): 977-980 [摘要] ( 553 ) [HTML 1KB] [PDF 584KB] ( 1243 ) 981 黄 健,莫 非 家蝇幼虫抗菌肽对幽门螺杆菌抗菌作用分析 目的 探讨家蝇抗菌肽(antibacterial peptides)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)的抗菌机制。方法 通过绘制抑菌曲线、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis ,SDS-PAGE)及双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)方法和技术,初步探讨家蝇对幽门螺杆菌作用机理。结果 浓度为40 μg/mL家蝇幼虫抗菌肽使H.pylori不能达到正常的生长高峰进入对数期,而1 d后直接进入衰亡期;通过SDS-PAGE检测发现实验组在分子量约66.4 kDa的蛋白条带浓度较对照组降低,而在分子量约40 kDa的蛋白条带浓度较对照组增高。双向电泳结果显示家蝇幼虫抗菌肽干扰了H.pylori的抗氧化系统,影响了H.pylori能量代谢和应激作用功能蛋白的表达。结论 家蝇幼虫抗菌肽对H.pylori具有明显的抑制作用,是通过抑制其生长、干扰其抗氧化系统,以及影响其能量代谢等方面,发挥家蝇幼虫抗菌肽的抑菌机制。 2013 Vol. 29 (10): 981-985 [摘要] ( 591 ) [HTML 1KB] [PDF 799KB] ( 1119 ) 986 陈经雕,刘美真,柯碧霞,谭海玲,李柏生,柯昌文 广东省猪链球菌2型菌株毒力基因及分子分型分析 目的 掌握广东地区猪链球菌2型菌株毒力因子及分子分型情况,为诊断、治疗和制定防控措施提供科学依据。方法 选取荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、溶血素(sly)、谷氨酸脱氢酶(gdh)、胞外因子(ef)等5个猪链球菌2 型主要毒力基因,分别设计引物对分离自病人、病猪的22株猪链球菌2 型菌株进行PCR检测,并对菌株进行MLST分型分析。结果 22株菌分为5种毒力基因型,其中cps2J+/mrp+/sly+/gdh+/ef+型别为病人及病猪菌株所共有,cps2J+/mrp+/sly-/gdh-/ef+、cps2J+/mrp+/sly-/gdh+/ef+为病人菌株所特有,cps2J+/mrp-/sly+/gdh+/ef+、cps2J+/mrp-/sly-/gdh+/ef-为病猪菌株所特有;MLST分型结果显示,22株分为ST1、ST7和ST28三个型别,其中ST1、ST7型为病人和病猪菌株所共有,均同属于ST1克隆复合物,ST28型为病猪所特有。结论 广东地区病人、病猪的猪链球菌2 型菌株毒力基因型及MLST分子分型均呈现多样化,且部分型别为两者所共有,为阐明猪传染给人提供了直接的证据。 2013 Vol. 29 (10): 986-990 [摘要] ( 574 ) [HTML 1KB] [PDF 692KB] ( 1187 ) 991 田玺择,吴 芳,章 乐,曹旭东,张万江 结核分枝杆菌H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株的构建与鉴定 目的 构建及鉴定结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株。方法 体外培养结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株,并提取基因组DNA,扩增Hsp16.3基因两侧序列,分别插入到pKO质粒载体预定位点中,构建Hsp16.3基因置换型打靶载体,电转入结核分枝杆菌H37Rv菌株内,并与其基因组中的Hsp16.3基因同源交换,筛选出Hsp16.3基因缺失突变株。结果 通过卡那霉素筛选和蔗糖反筛选及PCR鉴定,并在含有潮霉素培养基上不能生长的菌株为Hsp16.3基因缺失突变株。结论 成功构建出结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株Hsp16.3基因缺失突变株。 2013 Vol. 29 (10): 991-995 [摘要] ( 540 ) [HTML 1KB] [PDF 792KB] ( 1223 ) 996 谈忠鸣,张忠献,顾 玲,胡建利,朱叶飞,祁 贤,董 晨,汤奋扬,周明浩,鲍倡俊 一起皮肤炭疽疫情病原的实验室检测及毒力基因鉴定 目的 对2012年江苏省连云港市赣榆县一起皮肤炭疽疫情的病人临床标本及病牛肉标本进行快速分子诊断及毒力基因的鉴定。方法 用Real-time PCR方法对病人的血、焦痂标本及病牛肉标本进行炭疽杆菌染色体编码的rpoB基因及质粒PXO1、PXO2上pag、capA基因的检测,并对质粒上4种毒力基因(cya,pag,lef,cap)进行扩增并测序。结果 病人焦痂标本和病牛肉标本中均检测出rpoB基因和质粒PXO1、PXO2基因,4种毒力基因的测序结果证实扩增序列为炭疽杆菌质粒基因片段,病人标本与病牛肉标本的基因序列完全一致。结论 实验室检测结果证实此次皮肤炭疽疫情是由当地村民宰杀携带炭疽杆菌强毒株的病牛引起。 2013 Vol. 29 (10): 996-999 [摘要] ( 528 ) [HTML 1KB] [PDF 687KB] ( 1171 ) 1000 霍 治,余 平,程 文 沙眼衣原体初次和再次感染小鼠生殖道的初步研究 目的 观察小鼠初次和再次生殖道感染沙眼衣原体后对病原体的清除情况,抗体产生规律及病理表现。方法 将小鼠生物型沙眼衣原体C. muridarum 1×104 IFU阴道接种于C57B6背景雌性小鼠,分别取初次和再次感染后阴道拭子做沙眼衣原体培养,计算IFU,监测小鼠清除病原体情况;同时取小鼠尾静脉血,监测初次和再次感染后抗体产生情况;处死小鼠,检测子宫输卵管病理改变。结果 初次感染,小鼠生殖道感染病原体多,病程长,再次感染病原体明显减少,病程明显缩短;小鼠于初次感染2周后检测到抗体,之后迅速升高并维持在较高水平,再次感染后抗体维持高水平无明显改变;小鼠子宫输卵有明显病理改变,表现为炎症、官腔扩张积水,狭窄等。结论 成功建立沙眼衣原体初次再次感染小鼠生殖道模型,再次感染抗体水平无明显升高,但能有效控制感染,清除病原体,对炎症反应无明显改善。 2013 Vol. 29 (10): 1000-1005 [摘要] ( 611 ) [HTML 1KB] [PDF 542KB] ( 1075 ) 综述 1006 戴婷婷,周本江,王 红 环介导等温扩增技术及其在食源性吸虫感染检测中的应用 随着人们生活水平的提高,土源性寄生虫病的感染率和发病率日趋下降,与之相反,食源性寄生虫病更加引人关注,而食源性吸虫病是其中的重要组成。据WHO统计,目前已知能感染人体的食源性吸虫有100多种,感染者超过4000万人,还有10%的人口面临感染食源性吸虫的风险。目前对于腔道内寄生的食源性吸虫通常采用病原学诊断方法,但对于深部组织内寄生的食源性吸虫则缺乏有效的诊断方法。环介导等温扩增(LAMP)技术是新近发展起来的一种方法,它具有简便快速、灵敏特异、经济实用、且易于普及等优点,有替代传统PCR之势。但国内对LAMP法的了解和应用不多,基于其在食源性吸虫感染方面的诊断价值,本文予以介绍,以供借鉴。 2013 Vol. 29 (10): 1006-1010 [摘要] ( 601 ) [HTML 1KB] [PDF 721KB] ( 1079 ) 1011 方义亮,高 博,王宇平,肖 武,张建庆,王光辉,凌飞跃 DNA条形码在媒介蚊类鉴定中的应用 蚊类种类繁多、形态多样,与人类关系密切,可传播多种疾病。由于媒介蚊类的医学重要性,对其准确鉴定是一项重要和有难度的工作。本文在与蚊类形态鉴定方法对比的基础上,尝试从分子生物学方法上,对DNA条形码技术的概念、在蚊类鉴定上的应用以及发展趋势进行综述,以期对蚊传疾病的预防和控制、检验检疫有所帮助。 2013 Vol. 29 (10): 1011-1015 [摘要] ( 571 ) [HTML 1KB] [PDF 704KB] ( 1118 ) 1016 闫沁男,井申荣 猪输血传播病毒检测方法研究进展 猪输血传播病毒(Torque teno sus virus,TTSuV)是一种单链,无包膜的DNA病毒。在健康的或患有某些疾病的猪中,都能检测到它的存在,具有很高的流行率。目前,针对TTSuV的检测方法有多种,如PCR方法,血清免疫学方法等,但是各有优缺点,因此本文就现有的TTSuV检测方法做一个简单综述,使读者能够对TTSuV的检测方法有一个全面了解。 2013 Vol. 29 (10): 1016-1020 [摘要] ( 508 ) [HTML 1KB] [PDF 627KB] ( 1106 ) 1021 孙 涛,邓明俊,季新成,肖西志,徐 彪,凌宗帅,岳志芹,王 群,郑小龙 焦磷酸测序技术在确证贾第鞭毛虫和隐孢子虫中的应用 目的 本研究旨在通过对贾第鞭毛虫和隐孢子虫(简称“两虫”)进行序列信息分析的基础上,利用焦磷酸测序技术建立一种快速、简单地确证两虫的方法。方法 通过序列信息比对,对贾第鞭毛虫的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,tim)基因和隐孢子虫18S rRNA基因的保守区段设计扩增引物及测序引物。用Sheather’s蔗糖密度离心法从粪便标本中分离纯化贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊。酚-氯仿法抽提孢囊、卵囊总DNA,PCR扩增目的基因片段,采用焦磷酸测序技术(Pyrosequencing Technology,PSQ)针对两虫基因保守核苷酸区段进行测序分析。同时利用扩增引物与其他原虫进行特异性试验,利用测序引物进行重复性试验。结果 通过序列信息比对寻找到了表征贾第鞭毛虫tim基因和隐孢子虫18S rRNA基因的核苷酸保守区段,经焦磷酸测序后能进一步确证虫株的序列信息,同时与Sanger法测序结果比对显示一致。特异性试验表明,不与其它原虫发生交叉反应;重复性试验表明,重现性为100%。结论 基于序列分析的焦磷酸测序技术可以作为进一步确证两虫的方法使用。 2013 Vol. 29 (10): 1021-1025 [摘要] ( 535 ) [HTML 1KB] [PDF 1089KB] ( 1045 ) 1026 刘志国,任清华,王 妙,刘日宏,解新霞,李晓琳,崔步云,韩丽红 布病特异性血清学检测技术应用概述 布病是由布鲁菌属细菌侵入机体引起的传染-变态反应性疾病。目前,该病在世界范围内广泛流行,主要侵犯人类、家畜及其它多种动物,部分人或动物感染后并无明显临床表现,不能为临床布病确诊提供可靠依据。因此,准确、快速的检测诊断是预防和控制布病的关键环节。本文就目前国内外用于布病检测诊断的方法平板凝集试验(PAT)、琥红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光偏振试验(FPA) 、免疫胶体金技术(GICA)等特异性血清学检测技术予以概述。 2013 Vol. 29 (10): 1026-1031 [摘要] ( 511 ) [HTML 1KB] [PDF 862KB] ( 1221 ) 调查防治 1032 顾贵波,曹 东,端 青,闫明媚,齐景文,赵凤菊,魏 澍,郑洪玲,吴运谱,孙 洋, 刘 军,周 博,祝令伟,夏志平,郭学军,钱 军,杨 浩,何 君,李岩伟,冯书章 辽宁省一起牛炭疽疫情的诊断 2013 Vol. 29 (10): 1032-1035 [摘要] ( 604 ) [HTML 1KB] [PDF 845KB] ( 1087 ) 1036 王彦霞,尤爱国,康 锴,孙建伟 河南省钩端螺旋体病与宿主动物相关性分析 2013 Vol. 29 (10): 1036-1038 [摘要] ( 536 ) [HTML 1KB] [PDF 403KB] ( 1156 )

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