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文章快速检索     高级检索 中国人兽共患病学报   2013年 29卷 12期 刊出日期：2013-12-20 论著 实验研究 综述 学术资料 调查防治     论著 1133 强华, 刘光英, 朱苹, 陈豪, 郑晓辉 粪肠球菌心内膜抗原efaA基因转化株的构建及其对生物膜形成的影响 目的 构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株,探讨efaA基因在肠球菌生物膜形成及感染性心内膜炎致病中的作用。方法 PCR扩增粪肠球菌efaA基因,构建pAT28-efaA 重组子,经PCR、双酶切及测序鉴定,将重组子转化到efaA-野生株S14做为转化株(S14-pAT28-efaA);同时将空质粒 pAT28 转化到野生株作为对照株(S14-pAT28);IPTG诱导 efaA表达,SDS-PAGE、Western Blot 分析鉴定。微量滴定板法测定生物膜形成能力。将S14、S14-pAT28、S14-pAT28-efaA分别接种到96孔板,37 ℃培养24 h形成生物膜,结晶紫染色,测定孔板底部在595 nm的OD 值,比较efaA基因转化前后的生物膜形成能力。结果 成功构建粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因转化株;转化株的OD595 值大于野生株及空质粒转化株,P<0.05,空质粒转化株的OD595 值与野生株比较差异无统计学意义,P >0.05。结论 粪肠球菌心内膜炎抗原efaA基因有利于肠球菌生物膜的形成。 2013 Vol. 29 (12): 1133-1136 [摘要] ( 712 ) [HTML 1KB] [PDF 508KB] ( 1266 ) 1137 孙晖, 白向宁, 赵爱兰, 孟琼, 熊衍文, 卢珊 牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌分离株的多位点序列分型研究 目的 对牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)分析,了解菌株的遗传进化关系及致病潜力。方法 根据E. coli MLST数据库(http://mlst.ucc.ie/mlst/dbs/Ecoli)提供的MLST方案,对青海玉树牦牛中分离的54株STEC分离株的7个管家基因进行PCR扩增并测序,通过序列比对确定其等位基因及菌株序列型(Sequence type,ST),并使用BioNumerics软件构建最小生成树(Minimum spanning tree,MST),分析牦牛ST型与HUSEC及人源主要流行血清群STEC菌株ST型间的进化关系。结果 54株牦牛STEC菌株呈现高度遗传多态性,可分为31个ST型别,其中包括7个新的等位基因型和17个新的ST型,并存在与HUSEC及主要流行血清群STEC亲缘关系相同或相近的ST型别。结论 青藏高原牦牛携带的STEC具有遗传多样性及一定的特异性,部分菌株具有对人致病的潜力。 2013 Vol. 29 (12): 1137-1142 [摘要] ( 633 ) [HTML 1KB] [PDF 887KB] ( 1173 ) 1143 刘林艳, 张艳茹, 王永惠, 黄立奎, 梁宏德, 杨玉荣 弓形虫对猪小肠IEL数量与细胞因子表达的影响 目的 研究弓形虫对猪小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocytes, IEL)数量、IL-10、IFN-γ和IL-12表达水平的影响。方法 对疑似患弓形虫病的家猪,经临床观察、弓形虫血清学检测、病理剖检检查和病理组织学观察诊断,确诊5头弓形虫感染猪(感染组)和5头正常猪(对照组);采用HE染色检测小肠IEL数量和免疫组织化学方法检测IL-10、IFN-γ和IL-12的表达。结果 弓形虫血清学检测阳性,且在病变组织观察到弓形虫速殖子或假包囊,确诊病猪所患为弓形虫病;与对照组比较,感染组猪的空肠、回肠IEL数量明显增加(P＜0.01),十二指肠IL-10、十二指肠和空肠IFN-γ、十二指肠和回肠IL-12的表达降低(P＜0.01),回肠IL-10和IFN-γ的表达亦降低(P＜0.05)。结论 弓形虫感染猪小肠IEL数量增多,Th2型细胞因子IL-10和Th1型细胞因子IFN-γ、IL-12表达均降低,推测弓形虫调控IEL及其细胞因子,引起肠道黏膜免疫抑制,弓形虫入侵后维持肠道内环境平衡,说明IEL在抗弓形虫感染中并未起到积极作用。 2013 Vol. 29 (12): 1143-1150 [摘要] ( 645 ) [HTML 1KB] [PDF 1071KB] ( 1211 ) 1151 王毅, 王艳, 叶正兴, 马爱静, 代航, 许华清, 李东迅, 叶长芸 鉴定单增李斯特菌四个进化家系及两个亚系的多PCR方法的建立 目的 利用多重PCR(multiplex PCR)技术,建立针对单增李斯特菌4个进化家系(LineageⅠ、LineageⅡ、Lineage Ⅲ、Lineage Ⅳ)及2个亚系(Lineage ⅢA、Lineage ⅢC)的鉴定方法。方法 以 InlA、Lmo0733、Lmo0038、Lmo0735 和 LmaA 作为靶基因设计引物,建立同时鉴别LineageⅠ、LineageⅡ、Lineage ⅢA、Lineage ⅢC和 Lineage Ⅳ菌株的多重 PCR 反应体系,并对 387株单增李斯特菌进行了所属进化家系及亚系的鉴定。结果 387株单增李斯特菌可用本方法进行所属家系和亚系的分型,包括 LineageⅠ246株、LineageⅡ123株、Lineage ⅢA 4株、Lineage ⅢC 13株和 Lineage Ⅳ 1株。结论 本方法能准确鉴定单增李斯特菌的4个进化家系及2个亚系的菌株,可用于食品、临床标本中单增李斯特菌的病原学诊断和疫情暴发时的溯源调查。 2013 Vol. 29 (12): 1151-1156 [摘要] ( 764 ) [HTML 1KB] [PDF 469KB] ( 1397 ) 实验研究 1157 谢剑锋, 沈晓娜, 王美爱, 杨式芹, 修文琼, 黄萌, 张炎华, 翁育伟, 严延生, 郑奎城 2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒血凝素基因特征分析 目的 通过对2010-2012年福建省分离的H3N2亚型流感毒株血凝素HA1基因进行分析,了解2010-2012年福建省H3N2亚型流感病毒的基因特征和变异规律。方法 随机选择28株毒株,提取病毒RNA,采用RT-PCR扩增目的片段,纯化PCR产物后进行测序;利用DNAstar和Mega4.0等生物信息学软件进行核苷酸整理、拼接、校对、差异性比较以及基因进化树构建等分析研究。结果 28株H3N2亚型流感病毒HA1区核苷酸同源性在96.4%~100%之间。基因系统进化分析显示,其进化规律都是沿着树枝主干随着时间推移向上延伸,序列的差异和年代成正比。2010-2012年间HA1区共出现43个氨基酸位点的变化,其中有10个氨基酸位点变异累计涉及4个抗原决定簇,2个变异位点发生在受体结合位点(RBS)及其附近,应予高度重视。结论 相对于A/Perth/16/2009疫苗代表株,2012年的部分H3N2亚型流感出现了抗原漂移;部分毒株已出现氨基酸位点的改变,并涉及抗原决定簇及受体结合位点,提示2010-2012年福建省人群中流行的H3N2亚型流感正逐渐发生变异,应加强流感病原学监测,以及时发现新的流感变异株,为福建省流感防控提供科学依据。 2013 Vol. 29 (12): 1157-1161 [摘要] ( 544 ) [HTML 1KB] [PDF 653KB] ( 1170 ) 1162 杜骁杰, 王玲, 郑峰, 李敏, 王晶, 胡丹, 李先富, 王长军, 潘秀珍 猪链球菌真核样丝氨酸/苏氨酸激酶stk基因敲除株的构建 目的 构建猪链球菌(Streptococcus suis, S.suis)2型强毒株05ZYH33真核样丝氨酸/苏氨酸激酶(eukaryotic-like Ser/Thr kinase, eSTK) stk基因敲除突变株。方法 构建中间为壮观霉素抗性基因(Spcr),两侧为stk编码基因上下游同源序列的基因敲除质粒,通过同源重组筛选stk编码基因敲除突变株。结果 组合PCR分析和基因测序结果均显示stk编码基因完全被壮观霉素抗性基因替代,基因敲除突变株△stk构建成功。逆转录PCR(RT-PCR)证实了stk在转录水平上的缺失。对筛选的突变株进行连续传代培养,证实△stk能够保持稳定的壮观霉素抗性表型。结论 stk基因敲除突变株的成功构建,为阐明该基因在猪链球菌致病过程中的作用奠定基础。 2013 Vol. 29 (12): 1162-1167 [摘要] ( 515 ) [HTML 1KB] [PDF 1856KB] ( 1334 ) 1168 余源, 李明, 李冀, 沈海娥, 王洋, 李巍伟, 赵丽娜, 王崇罡, 田喜凤 C2株蓝氏贾第鞭毛虫组蛋白H2B基因的克隆与同源性分析 目的 获取C2株蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因序列,与WB株蓝氏贾第鞭毛虫及其他物种进行同源分析。方法 PCR扩增获取H2B组蛋白基因,连接pGM-T载体,转化E. coli DH5α感受态宿主细胞,挑选阳性克隆并进行序列分析,与美国WB株蓝氏贾第鞭毛虫及模式生物H2B组蛋白基因和蛋白序列进行同源分析。结果 测序C2株蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因序列,同源比对结果显示其基因序列与美国WB株完全一致,进化树分析表明贾第虫H2B组蛋白基因在进化过程中与其他物种分化较早。结论 蓝氏贾第鞭毛虫H2B组蛋白基因同源分析结果显示贾第虫与其他现存真核生物亲缘关系较为疏远,为进一步研究蓝氏贾第鞭毛虫的生物进化地位提供有价值的资料。 2013 Vol. 29 (12): 1168-1171 [摘要] ( 582 ) [HTML 1KB] [PDF 910KB] ( 1272 ) 1172 范贵荣, 杨致邦, 黄进, 高继业 脓肿分枝杆菌耐利福平机制的研究 目的 探讨脓肿分枝杆菌耐利福平的机制。方法 采用棋盘微量稀释法,分别测定利福平在加入不同浓度的改变细胞壁通透性的试剂和主动外排泵抑制剂时对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度。通过利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度的变化情况来分析细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平机制中的作用。结果 随着TWEEN-80、Trixon X-100、甲苯、乙醚、CCCP、利血平和泮托拉唑浓度的增加,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度逐渐降低。对于TWEEN-80、Trixon X-100、CCCP和泮托拉唑,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512 μg/mL降至小于32 μg/mL,0.1%的TWEEN-80、0.006 25%的Trixon X-100、0.1 μg/mL的CCCP和32 μg/mL的泮托拉唑为最适浓度;对于甲苯、乙醚和利血平,利福平对脓肿分枝杆菌的最低抑菌浓度由512 μg/mL降至64 μg/mL,0.25%的甲苯、0.25%的乙醚和8 μg/mL的利血平为最适浓度。它们均能促进利福平对脓肿分枝杆菌的抑菌作用。结论 细胞壁通透性和主动外排在脓肿分枝杆菌耐利福平的机制中有重要作用。 2013 Vol. 29 (12): 1172-1176 [摘要] ( 547 ) [HTML 1KB] [PDF 516KB] ( 1095 ) 1177 魏海霞, 李雪兰, 张浩, 彭鸿娟 孕妇弓形虫感染相关诱因的Meta分析 目的 分析宠物接触和吃生肉习惯与孕妇感染弓形虫的相关性。方法 从多个文献数据库中搜索关于孕妇弓形虫感染与宠物接触和吃生肉习惯的文献(无语言限制),运用StataSE 软件进行Meta分析。结果 宠物接触组中弓形虫感染率高于无接触组,比值比(Odds Ratios,OR)为2.35(95%置信区间:1.68～3.28),有吃生肉习惯组中弓形虫感染率也高于对照组,OR值为1.68(95%置信区间:1.40～2.01)。结论 接触宠物和吃生肉习惯是与孕妇弓形虫感染显著相关的危险因素。 2013 Vol. 29 (12): 1177-1180 [摘要] ( 507 ) [HTML 1KB] [PDF 628KB] ( 1176 ) 1181 杜东菊, 杨松涛, 高玉伟, 夏咸柱, 吕喆, 胡桂学 西尼罗河病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及间接ELISA方法的建立 目的 建立西尼罗河病毒(West Nile Virus, WNV)抗体检测方法。方法 人工合成了WNV NY99株E蛋白结构域Ⅲ(DⅢ)基因序列,构建了重组表达载体PET-28a-DⅢ。结果 重组质粒转化BL21宿主菌后诱导表达,SDS-PAGE分析表明,表达产物相对分子量17 kD,以包涵体形式存在。对表达产物作变性和复性及纯化处理,Western-blot鉴定结果表明,纯化产物可被WNV血清识别。将纯化重组蛋白包被酶标板,优化间接ELISA反应条件,抗原最佳包被浓度为3.75 μg/mL、血清最佳稀释度为1∶1 600、酶标二抗最佳稀释度1∶6 000、阴阳血清临界值为0.148。特异性、敏感性及重复性试验结果表明,本方法特异性强、敏感性高、重复性良好。结论 本研究为WNV感染的血清学诊断提供了技术储备。 2013 Vol. 29 (12): 1181-1185 [摘要] ( 500 ) [HTML 1KB] [PDF 679KB] ( 1133 ) 1186 马英, 李海龙, 李超, 魏有文, 郑谊, 李善龙, 白树学, 鲁亮, 刘起勇 基于DNA条形码技术鉴定青海柴达木盆地小型兽类 目的 为弥补传统形态分类方法不足,提高小型兽类现场鉴定成功率和准确性。方法 将采自青海省柴达木盆地总计3目5科12属145只小型兽类进行COI基因序列检测。结果 分析所测全部COI基因序列,种内遗传距离0.01%~2.2%,种间遗传距离10.9%~15.6%,种间遗传距离显著大于种内遗传距离。属间遗传距离16.2%~21.3%,科间遗传距离16.2%~27.0%, NJ树显示同种个体聚为高支持度的单一分支,在14个形态种中共发现17个分子种。讨论 研究结果表明DNA条形码技术能纠正传统形态学鉴定中的错误, 提高动物分类鉴定的准确性。 2013 Vol. 29 (12): 1186-1190 [摘要] ( 526 ) [HTML 1KB] [PDF 634KB] ( 1120 ) 1191 王曼, 张锡林, 黄玉清, 陈文碧, 佘俊萍, 向丽, 王光西 斯氏并殖吸虫线粒体Cytb基因的扩增、测序以及遗传进化分析 目的 扩增出斯氏并殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因片段并测序,分析该基因对吸虫遗传分类的意义。方法 提取斯氏并殖吸虫成虫基因组DNA, PCR扩增线粒体Cytb基因,克隆质粒并测序。在NCBI的GeneBank中作相似性和同源性检索,用DNAsis等软件分析这些吸虫的线粒体Cytb基因,采用最大简约法(MP)和邻位相连法(NJ)构建系统进化树,用MEGA4软件对遗传距离进行计算分析。结果 获得542 bp的斯氏并殖吸虫线粒体Cytb基因片段,通过在GeneBank数据库中Blast发现,斯氏并殖吸虫的Cytb序列与日本血吸虫(中国流行区虫种)、异盘并殖吸虫、哈氏并殖吸虫以及巨睾吸虫等7种吸虫有相似性,斯氏并殖吸虫与日本血吸虫的遗传距离最近。结论 线粒体Cytb基因可作为吸虫遗传进化分类的依据之一, 也是斯氏并殖吸虫与血吸虫等易出现较高的交叉反应率的原因之一。 2013 Vol. 29 (12): 1191-1195 [摘要] ( 540 ) [HTML 1KB] [PDF 872KB] ( 1174 ) 1196 白换力, 张海雷, 鞠传静, 孟轲音, 李忠义, 杨鹏, 徐静, 万家余, 申海清 阿魏酸抑制朊病毒复制作用的研究 目的 本试验通过已建立的ScN2a细胞模型,探讨阿魏酸对朊病毒复制的影响。方法 通过Western blot 法检测阿魏酸对朊病毒复制作用的影响。结果 0.5、1和5 μg/mL的阿魏酸能够极显著的抑制PrPSc的表达水平(P<0.01)。结论 由于中药单体阿魏酸可以抑制ScN2a中PrPSc蛋白的复制,所以中药单体阿魏酸对朊病毒病可能起到一定的治疗作用,这为我们以后对于研究朊病毒的治疗提供了新的思路。 2013 Vol. 29 (12): 1196-1198 [摘要] ( 594 ) [HTML 1KB] [PDF 702KB] ( 1004 ) 1199 曾春艳, 张松旺, 于长国 结核感染T细胞斑点试验在肾结核诊断中的应用研究 目的 评估结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)在肾结核诊断中的应用价值。方法 分别采用T-SPOT.TB和皮肤结核菌素试验(TST)对112例肾结核疑似病例进行检测,数据使用Kappa检验和Z检验进行统计学分析。结果 112例肾结核疑似病例经临床确诊肾结核44例。与临床诊断相比较,T-SPOT.TB对肾结核诊断的敏感度为95.5%,特异性为92.6%,准确性为93.8%,Youden指数为0.881,Kappa值为0.871;TST对肾结核诊断的敏感度为97.7%,特异性为62.3%,准确性为75.0%,Youden指数为0.60,Kappa值为0.525。T-SPOT.TB的敏感度和阴性预测值与TST相近,差异无统计学意义(P>0.05),特异性和阳性预测值均高于TST,差异有统计学意义(P≤ 0.05)。结论 T-SPOT.TB在肾结核的检测方面价值优于TST,在辅助肾结核诊断方面具有很高的应用价值。 2013 Vol. 29 (12): 1199-1202 [摘要] ( 526 ) [HTML 1KB] [PDF 509KB] ( 1055 ) 综述 1203 贾悦, 戴建荣 氯硝柳胺的环境行为研究进展 氯硝柳胺是我国血吸虫病流行疫区现场广泛使用的杀螺药物,在血吸虫病防治领域发挥了巨大作用。但其对非目标生物的毒性以及是否会对生态环境产生影响,已引起学者广泛的关注。为此本文概述了氯硝柳胺在水-土壤系统中的降解、吸附等环境行为以及在生物体内的代谢行为,以期为其生态环境风险评价提供参考依据。 2013 Vol. 29 (12): 1203-1107 [摘要] ( 510 ) [HTML 1KB] [PDF 744KB] ( 1268 ) 1208 陈祥, 殷嘉浚, 焦新安 喹乙醇耐药基因 oqxAB 的发现与流行 喹乙醇是一种喹噁啉-N1, N4-二氧化物,作为动物生长促进剂而被广泛使用,曾被认为是一种相对安全的抗菌药物。随着该药物在养殖业中的长期使用,其耐药问题也逐步被认识。2003年从丹麦猪粪中分离出一株大肠杆菌,含有介导喹乙醇耐药的接合型质粒pOLA52。次年研究发现质粒pOLA52携带外排泵基因oqxAB,不仅介导喹乙醇耐药,还能降低细菌对氯霉素、喹诺酮类药物的敏感性。因此,2009年oqxAB基因也被归为一种质粒介导的喹诺酮类药物耐药(Plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因。本文对喹乙醇耐药基因oqxAB的发现与流行做一综述。 2013 Vol. 29 (12): 1208-1211 [摘要] ( 624 ) [HTML 1KB] [PDF 514KB] ( 1042 ) 1212 刘晓龙, 王越, 干小仙 免疫蛋白质组学技术在寄生虫病诊断抗原筛选中的应用 免疫蛋白质组学(immunoproteomics)是由蛋白质组学与现代免疫学相结合形成的一门新兴的交叉学科,已广泛应用于肿瘤、自身免疫性疾病以及感染病的生物标志物筛选与鉴定。本文就近5年来免疫蛋白质组学技术在寄生虫病免疫诊断抗原筛选中的应用作文献综述。 2013 Vol. 29 (12): 1212-1216 [摘要] ( 557 ) [HTML 1KB] [PDF 660KB] ( 1288 ) 1217 徐颖, 高琦, 徐前明, 朱兴全 弓形虫棒状体颈部蛋白及棒状体蛋白研究的新进展 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生原虫。因其复杂的生活史和致病机理,目前尚无有效的专用药物进行治疗。近年来,关于抗弓形虫免疫及疫苗的研究逐步深入,棒状体颈部蛋白(RONs)及棒状体蛋白(ROPs)作为重要的抗弓形虫疫苗的候选抗原分子,广泛应用于新型抗弓形虫疫苗的研究中。本文总结了近几年来弓形虫棒状体颈部蛋白及棒状体蛋白的研究新进展,尤其是这些RONs 及ROPs作为新型DNA疫苗分子研究的最新进展。 2013 Vol. 29 (12): 1217-1221 [摘要] ( 703 ) [HTML 1KB] [PDF 705KB] ( 1195 ) 调查防治 1222 叶凌, 王承维, 任宜, 柴能明 舟山海岛地区24例新型布尼亚病毒感染病例临床及流行特征分析 目的 分析舟山海岛地区2011-2012年报告的24例新型布尼亚病毒感染病例的临床及流行特征。方法 通过病例的临床和流行病学调查、媒介生物的监测分析,描述舟山海岛地区新型布尼亚病例的临床特征和流行特征。结果 岱山县2011-2012年确诊报告24例病例,其中死亡2例。病例以发热伴恶心或乏力为首发症状,37.50%病例有腹泻症状,50.00%病例有浅表淋巴结肿大;血WBC、PLT呈进行性下降,重症病例居多。4例病例发病前2周内有被蜱叮咬史。从病例血清中分离到2株病毒株。通过布旗法捕获蜱类,从蜱中检测出新型布尼亚病毒核酸阳性;采用鼠笼法捕鼠RT-PCR检测未发现核酸阳性。 舟山地区的海岛县岱山县为浙江省新型布尼亚病毒的自然疫源地之一,外来者进入野外活动有感染的风险。重症及死亡病例的病毒载量相对较高,病例病程晚期的血液或体液有可能有感染他人风险,轻症病例在流行病学意义有待于进一步研究。结论 蜱为新型布尼亚病毒的主要传播媒介,但在蜱外是否存在其他传播媒介,储存宿主、传播途径和传播媒介尚需进一步验证。 2013 Vol. 29 (12): 1222-1228 [摘要] ( 598 ) [HTML 1KB] [PDF 569KB] ( 1146 ) 1229 张涛, 卢世堂, 李丽 宁夏东部荒漠草原啮齿动物种群的多样性研究 宁夏东部荒漠草原地处毛乌素沙漠南缘，属中温带大陆性气候,风多沙大,干旱少雨等自然灾害十分频繁。年平均气温7.6 ℃,无霜期128 d,年平均降水294.6 mm,且分布不均。鉴于宁夏东部作为能源、化工基地、国际空港中心及生态环境保护区建立，因此研究宁夏荒漠草原的生物多样性具有十分重要的意义。 2013 Vol. 29 (12): 1229-1230 [摘要] ( 474 ) [HTML 1KB] [PDF 337KB] ( 1072 ) 1225 李永学, 刘敏, 王树声, 廖国厚, 曾霞 广西莱姆病的初步调查研究 2013 Vol. 29 (12): 1225-1228 [摘要] ( 0 ) [HTML 1KB] [PDF 0KB] ( 68 ) 学术资料 1231 欧剑鸣, 黄丰 美国《Emerging infectious diseases》2013年第10期有关人兽共患病论文的摘译 2013 Vol. 29 (12): 1231-1231 [摘要] ( 532 ) [HTML 1KB] [PDF 0KB] ( 355 )

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