中国人兽共患病学报
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中国人兽共患病学报
 
2020年 36卷 10期
刊出日期:2020-10-20

论著
学习·发现·交流
新冠专题
实验研究
综述
学术资料
   
新冠专题
775 陈爱平, 凌华, 叶盛, 张拥军
SARS-CoV-2基因组流行病学研究进展
为抗击2019年冠状病毒病(COVID-19)全球大流行,世界各地投入了大量资源开展基因组测序,目前已有超过55 000个SARS-CoV-2毒株序列汇集到GISAID网站。由于SARS-CoV-2病毒基因组较大、编码相对复杂,给基因组流行病学分析带来了挑战。本文总结了目前SARS-CoV-2病毒基因组流行病学研究进展,以便专业人员及时了解SARS-CoV-2病毒特征及传播趋势,充分利用基因组流行病学平台资源和工具,推动疫苗研制和治疗药物开发,促进这场全球大流行疫情的防控。
2020 Vol. 36 (10): 775-779 [摘要] ( 140 ) [HTML 1KB] [PDF 1090KB] ( 1188 )
780 王常乐, 王磊, 郝冉, 乔红秀, 赵艳, 揣侠
SARS-CoV-2的研究进展
新型冠状病毒(SARS-CoV-2)属冠状病毒家族中的新成员,从感染人体引起第一例不明原因肺炎开始,已导致世界累计确诊人数超2 000万人。此种病原体感染性之强,传播之迅速,远超2003年流行的SARS冠状病毒(SARS-CoV)。目前,各国学者已广泛开展SARS-CoV-2的研究,更为深入解析该病毒的微生物学特性的同时,也在逐步开展疫苗、治疗性抗体和抗病毒药物的研究工作。尤其是在疫苗研发中,我国已取得令人瞩目的 成果。本文基于当前SARS-CoV-2最新研究进展,对该病原体的生物学特性、起源、感染与宿主免疫反应、传播及治疗等做出研究与探讨。
2020 Vol. 36 (10): 780-785 [摘要] ( 147 ) [HTML 1KB] [PDF 1123KB] ( 1253 )
786 李天萍, 陈爱平
新型冠状病毒肺炎实验室诊断方法进展
在应对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)全球大流行疫情过程中,实验室诊断发挥了至关重要的作用。本文对现有COVID-19实验室诊断方法,包括常用的核酸检测和血清学抗体检测进行分析总结,以便医务人员及时了解该领域进展,选择合适的检测试剂和筛查策略,共同抗击这场大流行疫情。
2020 Vol. 36 (10): 786-790 [摘要] ( 169 ) [HTML 1KB] [PDF 1090KB] ( 1317 )
791 曾林子, 田自城, 黄玉兰, 韩声付, 肯布, 张光慧, 贾春燕, 杨小蓉
3种新型冠状病毒核酸检测试剂对120份样本检测结果的比较与分析
目的 对市售的3种国产新型冠状病毒核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)的检测结果进行比较和分析,以供检测机构参考。方法 采用3种核酸检测试剂(实时荧光RT-PCR法)对120份新冠肺炎病人和密切接触者的咽拭子、尿液、唾液和粪便样本进行平行检测,运用SPSS20软件采用卡方检验对检测结果进行分析。结果 120份样本中,3种试剂阳性率分别为42.50%(51/120)、39.17%(47/120)和41.67%(50/120),阳性检出率无统计学差异(χ2=0.298,P>0.05),对4种样本检测阳性检出率,差异无统计学意义(P>0.05)。3种试剂检测结果一致的有89份。检测结果一致性从高到低为:A试剂和C试剂>B试剂和C试剂>A试剂和B试剂。结论 由于不同厂家试剂灵敏度和准确性不同导致检测结果和检测一致性存在差异,提示试剂厂家需进一步优化性能,提高检测灵敏度和准确性,同时各检测机构应采取多种质控方法以确保新冠病毒核酸检测准确性,以便更好地为疫情防控、病人救治提供科学依据。
2020 Vol. 36 (10): 791-796 [摘要] ( 160 ) [HTML 1KB] [PDF 1077KB] ( 1169 )
797 李宝林, 袁兰, 叶婷, 田刚, 曾章锐, 蔡宛玲, 罗思剑, 刘靳波
114例疑似COVID-19患者呼吸道病毒感染分析
目的 分析114例COVID-19疑似患者呼吸道病毒感染情况, 探讨多种病毒同时检测在疫情防控中的价值。方法 利用Real Time RT-PCR技术检测发热门诊COVID-19疑似患者SARS-CoV-2核酸,利用基因芯片恒温扩增技术检测SARS-CoV-2核酸阴性患者其他常见的18种呼吸道病毒。结果 114例COVID-19疑似患者SARS-CoV-2核酸均为阴性,有21例感染了非其它呼吸道病毒,感染率达18.42%,21例患者中共检测出10种呼吸道病毒,包括冠状病毒NL63/229型、呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒A16型、乙型流感病毒、人副流感病毒1型、人副流感病毒3型、人偏肺病毒、甲型流感病毒、甲型流感病毒季节性H3亚型、肠道病毒/鼻病毒。其中乙型流感病毒感染患者最多,有6例,呼吸道合胞病毒有5例。有3例患者同时感染2种病毒:呼吸道合胞病毒与柯萨奇病毒A16型混合感染、冠状病毒NL63/229型与人副流感病毒1型混合感染、甲型流感病毒与甲型流感病毒季节性H3亚型混合感染。结论 在应对本次SARS-CoV-2疫情中,针对COVID-19疑似患者中,要注意鉴别SARS-CoV-2与其它呼吸道病毒,及时有效地排除疑似病例。
2020 Vol. 36 (10): 797-800 [摘要] ( 190 ) [HTML 1KB] [PDF 1693KB] ( 1152 )
论著
801 李汶霖, 李淑凝, 沈海娥, 章曾思琦, 田喜凤, 王洋
蓝氏贾第鞭毛虫α-19贾第素的单克隆抗体制备与亚细胞定位研究
目的 制备蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)α-19贾第素的特异性抗体,并通过免疫荧光对该贾第素的亚细胞定位进行鉴定。方法 经PCR获得α-19贾第素编码区片段,双酶切将目的 片段连入原核表达载体pET-28a(+)-α-19,重组载体转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE及 Western blot验证表达情况;采用设计的合成抗原肽免疫小鼠经细胞融合和筛选制备特异性单克隆抗体,分别用贾第虫滋养体裂解物和α-19贾第素重组蛋白Western blot验证抗体特异性和结合力,选择特异性最好的单克隆抗体通过免疫荧光技术对α-19贾第素的亚细胞定位进行观察。结果 成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-19,经SDS-PAGE及 Westernblot分析显示重组载体在大肠杆菌中表达出相对分子量约49 kD的重组蛋白,与理论值相符;Western blot显示单克隆杂交瘤细胞株α-19-3-7-3-5分泌的抗体结合力和特异性俱佳,可用于定位研究;免疫荧光定位结果表明α-19贾第素主要位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。结论 制备了α-19贾第素的特异性单克隆抗体,免疫荧光显示α-19贾第素定位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。
2020 Vol. 36 (10): 801-806 [摘要] ( 157 ) [HTML 1KB] [PDF 1993KB] ( 1098 )
实验研究
807 彭文军, 曹得萍, 张耀刚, 刘燕, 姜博璠, 赵海龙
绵羊肝脏、肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达分析
目的 探讨绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达谱,为虫体生长、发育调控特异性蛋白筛选奠定基础。方法 提取寄生于绵羊肝脏与肺脏棘球蚴原头节蛋白质样本进行 SDS-PAGE 分析后,利用iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析(LC-MS/MS)寄生于绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节蛋白质表达谱,通过Mascot软件和GO软件分析寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节的差异表达蛋白质。结果 本研究共鉴定了1 229个有意义的蛋白质点,通过肝脏与肺脏比较有无差异性(肝脏原头节 VS肺脏原头节)和调节趋势后获得217个差异表达蛋白质,在肝脏上调蛋白74个(脂肪酸绑定蛋白、ɑ纤维蛋白原、环氧化物酶、过氧化氢酶、酰基COA合成酶、载脂蛋白A4、磷酸化酶、6-磷酸葡萄糖内脂酶、乙酰辅酶酰基转移酶、还有一些未鉴定的蛋白等);下调蛋白143个(乳酸脱氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、内质网氧化还原酶、肌动蛋白、肌球蛋白、天冬酰胺酶、铁蛋白、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、热休克蛋白90、胶原纤维I,胶原纤维IV、波形蛋白、玻连蛋白、磷脂转运蛋白、磷酸甘油酸激酶)。结论 本研究发现寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节蛋白质表达存在差异。
2020 Vol. 36 (10): 807-812 [摘要] ( 177 ) [HTML 1KB] [PDF 2590KB] ( 1303 )
813 唐媚娜, 何伟, 肖卫红, 熊银, 饶亚华, 胡志敏
基于RNA-seq分析戊型肝炎病毒感染HepG2细胞后的差异表达基因
目的 研究戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染人肝癌细胞HepG2前后,HepG2细胞的相关基因表达变化,为初步探索HEV在宿主细胞内感染机制及致病机理奠定基础。方法 对HEV感染组HepG2细胞和对照组HepG2细胞的RNA进行高通量测序(RNA-seq技术),利用生物信息学方法对测序数据进行分析,对感染组和对照组的差异表达基因进行筛选、功能注释和通路富集分析。结果 以基因表达差异倍数在2倍及以上为标准,从感染组与对照组共筛选出差异表达基因132个,其中,感染组相比于对照组,上调表达基因127个,下调表达基因5个。Gene Ontology(GO)功能富集分析注释结果显示,差异表达基因主要富集在病毒防御反应、固有免疫应答、病毒基因组复制的负调控及干扰素应答等过程;主要行使RNA结合、蛋白结合、调节解旋酶活性、NAD+ ADP-核糖基转移酶的活性等分子功能。利用KEGG数据库作为参考,这些基因主要参与甲型流感、单纯疱疹感染、麻疹、C型肝炎、RIG-I样受体信号通路、病毒致癌、乙型肝炎、Toll样受体信号通路、胞质DNA传感通路、趋化因子信号转导通路和细胞凋亡等通路。结论 通过功能及通路筛选,发现DDX58、STAT1、CXCL8、STAT2、TLR3、CXCL10、EIF2AK2、IRF9和IFIH1等基因可能在HEV感染抗病毒免疫过程中发挥重要作用。
2020 Vol. 36 (10): 813-820 [摘要] ( 151 ) [HTML 1KB] [PDF 2684KB] ( 1120 )
821 李美辰, 潘靖丹, 范泽华, 陈万楼, 陈彩铃, 吴合亮, 李天歌, 孙亚杰, 杜娈英
旋毛虫肌幼虫ESPs作用于小细胞肺癌H446细胞蛋白组分变化分析
目的 分析旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫排泄分泌蛋白(excretory-secretory proteins,ESPs)作用于小细胞肺癌H446细胞后蛋白组分的变化。方法 制备旋毛虫肌幼虫ESPs,把H446细胞分成实验组和对照组。实验组加入0.85 mg/mL ESPs,对照组加入不含血清的RPMI1640培养基,24 h后收集细胞并提取总蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白后酶解,采用液质联用质谱法(LC-MS/MS)对酶解产物进行鉴定,通过Gene Ontology(GO)分析,对鉴定出的实验组与对照组有差异的蛋白质的细胞组分、分子功能和生物过程进行富集分析。结果 实验组共鉴定出240种蛋白质,其中有204种为已明确鉴定的蛋白质,22 种为未明确鉴定的蛋白质,14 种为假定蛋白质。从已知的204种蛋白质中检索出1种与存在于旋毛形肌幼虫排泄分泌蛋白中且与抗肿瘤相关的蛋白质H2A(histone 2A)。对照组鉴定出233种蛋白质。实验组和对照组重合蛋白质191种,非重合蛋白分别有49种和42种。结论 旋毛虫肌幼虫ESPs作用于H446细胞后,细胞内蛋白组分发生了复杂变化,提示其抗肿瘤作用机制和过程复杂。
2020 Vol. 36 (10): 821-826 [摘要] ( 158 ) [HTML 1KB] [PDF 1370KB] ( 1072 )
827 邢燕, 钱玉春, 张文艳, 胡忠旺, 孙永
1株携带质粒介导喹诺酮耐药基因qnrS1和qepA1的多耐药沙门菌的基因特点分析
目的 分析一株多重耐药沙门菌SM846的遗传背景,研究其对喹诺酮耐药的机制。方法 测定SM846对14种药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitoryconcentration,MIC)。用三代测序技术对菌株进行全基因组测序,根据耐药数据库注释SM846序列中的耐药基因。使用NCBI的BLAST工具搜索与耐药质粒相似的序列,并进行生物信息学分析。结果 SM846对14种测试抗生素中的12种表现出耐药,包括喹诺酮类抗生素萘啶酸和环丙沙星。SM846包含1条染色体和1条质粒。染色体序列不含可导致耐药的基因和突变,质粒携带13个耐药基因,包括喹诺酮类耐药基因qepA1和qnrS1。qepA1和qnrS1位于质粒内部的可移动原件I类整合子上。13条相似质粒的分析表明中国分离的此型别的质粒耐药性强于美国和加拿大分离的。结论 QnrS1和qepA1基因通过IS6和可移动元件整合到质粒的I类整合子上,说明SM846可能迫于抗生素压力通过获得耐药基因来快速适应环境。中国分离菌株的耐药性强,地区间的耐药情况差异,尤其是与不发达国家之间的差异提示我们应当继续监测各地区的耐药表现型,以制定本地的耐药控制策略。
2020 Vol. 36 (10): 827-833 [摘要] ( 163 ) [HTML 1KB] [PDF 2268KB] ( 1116 )
834 杨晓雯, 赵鸿雁, 朴东日, 田国忠, 姜海
人工诱变利福平抗性布鲁氏菌转录组测序分析
目的 筛选布鲁氏菌中参与利福平代谢相关基因(除rpoB基因外)。方法 利用人工诱变技术获得利福平抗性菌株,通过转录组测序获得标准菌株和利福平抗性菌株全基因组水平的基因表达量,利用EBSeq算法筛选差异表达基因,预测利福平代谢相关基因及主要代谢途径。结果 通过不同浓度的利福平人工诱变,能够获得抗性表型稳定的布鲁氏菌变异菌株。转录组测序发现利福平抗性菌株中有121个基因表达量上调,197个基因表达量下调,差异基因功能主要集中于催化活性、细胞膜和细胞成分、代谢过程和细胞过程;主要参与抗生素的生物合成、细菌分泌系统和ABC 转运蛋白等代谢通路。结论 包括virB操纵子在内的涉及碳代谢等代谢通路的基因,通过表达量的改变参与抵抗利福平的作用。 本研究为布鲁氏菌耐药相关基因的筛选提供新思路,同时为布鲁氏菌耐药菌株的防控提供基础性数据。
2020 Vol. 36 (10): 834-839 [摘要] ( 152 ) [HTML 1KB] [PDF 2933KB] ( 1064 )
840 马彦, 曹雪, 李雯, 李雪静, 冀英, 杨静, 岑雯, 冯文莉
烟曲霉Bem46基因荧光定位菌株构建及对极性生长相关基因影响作用初探
目的 构建以eGFP作为荧光标记的烟曲霉Bem46基因定位菌株,观察其在烟曲霉不同形态中的定位情况,初步明确该基因对极性生长相关基因Bem1、Bud5表达的影响。方法 运用分子生物学方法将烟曲霉Bem46基因克隆入质粒pUCGH,构建荧光定位载体。原生质体法转化烟曲霉获得该基因定位菌株并验证。激光共聚焦显微镜观察绿色荧光在烟曲霉孢子、芽管以及菌丝状态下分布情况。RT-PCR观察对照菌株Ku80和ΔBem46中极性生长相关基因Bem1、Bud5的表达量。结果 通过全基因克隆成功获得烟曲霉Bem46基因定位菌株并经PCR验证。激光共聚焦显微镜下绿色荧光在孢子中弥散分布,在孢子即将发芽时荧光在孢子一侧聚集,并随着芽管形成,荧光在极性生长的一侧延伸分布于整个菌丝中,在菌丝形成侧枝膨大处可见荧光明显聚集。RT-PCR结果表明ΔBem46中基因Bem1、Bud5表达量均较对照菌株有所下降。结论 烟曲霉Bem46基因可能同孢子发芽、菌丝发生侧枝的极性生长相关;且该基因缺陷可影响极性生长相关基因Bem1、Bud5表达。
2020 Vol. 36 (10): 840-846 [摘要] ( 139 ) [HTML 1KB] [PDF 3246KB] ( 1066 )
847 刘熔, 王昌敏, 郝立君, 卢佩佩, 李智伟
调节性T细胞在布鲁氏菌感染中的变化特点研究
目的 明确调节性T细胞(Treg),Foxp3基因,白细胞介素10(IL-10)在布鲁菌病中的变化特点及相关性。方法 收集新疆维吾尔自治区人民医院2019年6月-2019年12月期间20例急性布鲁菌病患者、29例慢性布鲁菌病患者和52例健康对照人群的外周血,使用流式细胞术检测Treg细胞数量,提取PBMC使用荧光定量PCR检测Foxp3的mRNA水平,使用AimPlex法检测血浆中IL-10含量。对Treg细胞与Foxp3 mRNA,IL-10的相关性进行分析。结果 与正常对照组相比,急性布病组的Treg细胞比例增加(t=2.87,P=0.01),Foxp3的mRNA水平增高(t=3.42,P<0.01),IL-10水平增高(t=7.90,P<0.01);慢性布病组的Treg细胞数量增加(t=10.82,P<0.01)、Foxp3的mRNA水平增加(t=6.89,P<0.01)和IL-10水平均明显增高(t=21.42,P<0.01)。与急性布病组相比,慢性布病组的Treg细胞数量增加(t=4.96,P<0.01),Foxp3的mRNA水平增加(t=2.38,P=0.02),IL-10水平明显增高(t=7.64,P<0.01)。布鲁菌病患者的Foxp3的mRNA表达水平与Treg数量呈正相关(R=0.72,P<0.01),IL-10水平与Treg数量呈正相关(R=0.71,P<0.01)。结论 布鲁氏菌感染后出现Treg细胞数量增多,Foxp3基因表达上调以及IL-10水平增高的现象,这可能是导致布鲁氏菌持续感染的原因。
2020 Vol. 36 (10): 847-851 [摘要] ( 174 ) [HTML 1KB] [PDF 1785KB] ( 1095 )
852 黄明翔, 陈新朝, 陈晓红, 方美兰
KOD DNA聚合酶荧光PCR技术在肺结核诊断中的应用评价
目的 评估基于KOD DNA聚合酶的荧光PCR技术在肺结核诊断中的临床应用价值。方法 采集2019年10月至2020年4月疑似肺结核的住院患者痰标本,进行涂片抗酸染色、MGIT960液体培养、KOD DNA聚合酶荧光PCR和Taq DNA聚合酶荧光PCR检测。以临床诊断结果为参照,MGIT960液体培养法为金标准,荧光PCR与Taq DNA聚合酶荧光PCR法比较,评价KOD DNA聚合酶荧光PCR法检测MTB的效能。结果 共对337例临床样本进行检测,MGIT960液体培养法、Taq DNA聚合酶荧光PCR和KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度分别为71.56% (156/218)、76.15% (166/218) 和76.61% (167/218)。KOD DNA聚合酶荧光PCR与MGIT960液体培养检测敏感度差异无统计学意义 (χ2=1.445,P=0.229>0.05)。KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB的敏感度和特异度分别为92.31% (144/156)和86.39% (146/169),涂阴患者中检测敏感度和特异度分别84.21% (64/76)和88.48% (146/165)。结论 KOD DNA聚合酶荧光PCR检测MTB敏感度和特异度较高,能够为临床诊断肺结核提供依据,操作简便、快速,适合在我国各级结核病实验室推广。
2020 Vol. 36 (10): 852-857 [摘要] ( 151 ) [HTML 1KB] [PDF 1095KB] ( 1066 )
学习·发现·交流
858 梁小洁, 严延生, 张智芳, 王晓欢, 林志龙
肾综合征出血热
肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)是一种全球性分布、由分节段的单股负链RNA病毒引起、主要由啮齿动物传播、临床上具有典型特征的传染病。上世纪70~80年代是我国HFRS 流行最严重时期,通过采取以灭鼠防鼠为主的综合防治措施,并且从20世纪90年代开始,采用自主研制生产的疫苗接种免疫,使我国HFRS疫情得到了控制。虽然近年来我国经济发展、城乡环境也发生巨大变化,但该病仍时有发生。鉴于HFRS危害性较大,本文简要描述本病的各方面特点,旨在预防本病发生。
2020 Vol. 36 (10): 858-863 [摘要] ( 170 ) [HTML 1KB] [PDF 1116KB] ( 1250 )
综述
864 徐鹤峰, 胡桂学
埃博拉病毒病概述
埃博拉病毒病是由埃博拉病毒感染引起人和灵长类动物的一种以发热、出血和腹泻为主要临床特征的烈性传染病,病死率高达90%。本病于1976年首次发现于非洲的扎伊尔和苏丹,至今已在非洲造成多次大规模的暴发流行。近年来本病已传播至非洲大陆以外的地区,如美国、西班牙、英国和意大利均有发生,这引起了全世界的广泛关注。为了有效防控埃博拉病毒病,本文从病原学、流行病学、临床症状、病理变化以及预防与控制等方面进行概述。
2020 Vol. 36 (10): 864-872 [摘要] ( 151 ) [HTML 1KB] [PDF 1209KB] ( 1396 )
873 徐忆莲, 刘琼, 黄孝天
免疫蛋白酶体在病毒感染中的作用
蛋白酶体是细胞内存在的一种多亚基复合物,对真核细胞内环境的稳态有着至关重要的作用。其中,免疫蛋白酶体是能够调控炎症因子、参与MHC-I抗原提呈路径的一类特殊蛋白酶体。本文对近年来免疫蛋白酶体在病毒复制、免疫逃逸、致病性以及抗病毒治疗等方面的研究进展进行综述,为设计新型抗病毒药物提供新思路。
2020 Vol. 36 (10): 873-875 [摘要] ( 155 ) [HTML 1KB] [PDF 1233KB] ( 1236 )
876 李瑞, 尹家祥
生态地理景观要素土壤与鼠疫的关系
生态地理景观是鼠疫自然疫源地形成的重要因素,由土壤、地形、气候、植被等要素构成,其中土壤要素在鼠疫静息期和流行期中起到了重要作用。本文结合鼠疫菌在土壤中的保存假说以及土壤性质对鼠疫流行的影响进行综述。
2020 Vol. 36 (10): 876-880 [摘要] ( 155 ) [HTML 1KB] [PDF 1105KB] ( 1098 )
学术资料
881 陈朱云(译)
美国《Emerging Infectious Diseases》2020年第8期有关人兽共患病论文摘译
2020 Vol. 36 (10): 881-882 [摘要] ( 141 ) [HTML 1KB] [PDF 14082KB] ( 1102 )
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