2.1 BCSP₃₁该蛋白分子量大小约31 kD,为布鲁氏菌细胞外膜蛋白,它抗原性强,具有保守性及多态性,且种间同源性较高,经证实牛、羊、猪布鲁氏菌BCSP₃₁基因同源性可达100％^{[ 20]}。不同研究团队的免疫蛋白质组学结果显示,该蛋白既有良好的免疫反应性,又有较高的特异性^{[ 21, 22]}。在布鲁氏菌的基因诊断中,BCSP₃₁的编码基因也被作为PCR诊断的主要靶点^{[ 23]}。但有研究者利用蛋白芯片进行布鲁氏菌蛋白免疫学检测时,BCSP₃₁的抗体只存在于感染的山羊血清中,而被测定的62份确认感染布病的人血清中并未发现其抗体^{[ 24]},这也提示该外膜蛋白作为诊断靶点在人群的检测中并不适用。

2.2 Omp10 该蛋白分子量大小为10 kDa,属于菌体外膜脂蛋白,是布鲁氏菌重要的免疫原性蛋白,存在于所有已知的布鲁氏菌的种和生物型之中^{[ 25, 26]}。Omp10与布鲁氏菌的毒力相关,有研究表明编码基因的3′端具有138 bp的核酸序列与HemH亚铁螯合酶相同,因此推测其与细菌对铁的利用和生物合成有关,其具体的作用机制有待进一步的研究^{[ 27]}。有关其作为诊断靶点进行研究的报道较少,且主要是国内的一些报道,在布鲁氏菌相关免疫蛋白质组的报道中^{[ 21, 22]},也找不到Omp10有关的信息。

2.3 Omp25 该蛋白分子量大小为25kDa,在维持布鲁氏菌菌外膜结构稳定性中发挥着重要作用。其编码基因在布鲁氏菌种、生物型及各菌株中是一个高度保守(除绵羊附睾种布鲁氏菌外同源性都在98％以上)。Omp25的氨基酸序列在与布病有交叉的细菌中又是最为特异。Boigegrain等^{[ 28]}在分析布鲁氏菌受到酸刺激分泌的蛋白质时发现, Omp25 也被分泌到了细胞外；这提示这种蛋白与布鲁氏菌的膜分泌系统相关,其可分泌的特征一方面说明其可能在菌相关蛋白中占有较高的丰度,相关蛋白质组分析显示其在2D图谱上出现多个蛋白点^{[ 21]}；另一方面,当布鲁氏菌感染宿主时,其可游离的特性使其更易激发机体发生抗体。

2.4 BP26又称Omp28,分子量大小为26 kDa,为布鲁氏菌细胞周质蛋白,BP26存在于所有的布鲁氏菌菌株中,在布鲁氏菌感染牛、绵羊、山羊和人中均为优势免疫原,许多报道显示其可以用来作为血清学检测的靶蛋白,并有较高的准确率^{[ 29, 30, 31]}；且有研究者采用蛋白芯片的方法发现,该蛋白在所的布鲁氏菌蛋白质组中唯一可与感染的人及羊血清特异反应的靶点^{[ 24]}。近来,BP26上两个线性表位已经确认(⁹³DRDLQTGGI¹⁰¹及¹⁰⁴QPIYVYPD¹¹¹)^{[ 32]},为进一步对该蛋白的免疫学分析提供了基础。综合上述信息,该蛋白在布病检测上有较好的应用前景。

2.5 Omp31 该蛋白分子量大小为25 kDa,该蛋白暴露于细菌表面,常以寡聚体形式存在,当温度低于60 ℃时,具有SDS变性的能力。它在布鲁氏菌不同种属间非常保守,除流产布鲁氏菌( B.Abortus)外,其它所有布鲁氏菌种株都有表达^{[ 33, 34]} 。Omp31可以诱导针对布鲁氏菌感染的细胞免疫作用,同时布鲁氏菌的Omp31有3个亲水性氨基酸残基片段,它还能引起保护性体液免疫反应^{[ 35]}。已有以OMP31为基础建立的免疫学检测方法检测布病的相关报道^{[ 36]},但在最近的蛋白芯片对感染人及山羊检测的报道中,均未发现针对该蛋白抗体^{[ 24]},因此对该蛋白作为检测靶点需进一步研究。

3.1 L7/L12 该蛋白分子量大小为10 kDa左右,为布鲁氏菌胞浆核蛋白,它是核糖体的重要组成部分,在细菌蛋白质合成过程中与延长因子相互作用,在布鲁氏菌中它的基因同源性高达97.1％以上,免疫原性分析L7/L12只有第15至第35个氨基酸属于疏水性氨基酸,剩余亲水性氨基酸残基占整个蛋白序列的80％以上^{[ 35]},且作为抗原决定簇构成了蛋白的主要部分,是T细胞优势抗原。以其为基础构建的疫苗对感染具有最显著的抵抗作用^{[ 37, 38]}。因此该蛋白是一个潜在的诊断靶点。

3.2 GroEL 该蛋白分子量大小为60 kDa左右,是微生物中参与蛋白损伤修复的重要蛋白,同时在压力条件下保持蛋白的正常折叠中发挥重要作用。有研究者通过构建的布鲁氏菌纳米小体抗体文库,发现文库可特异性的识别伴侣蛋白GroEL,从而认为该蛋白是布鲁氏菌的免疫主要蛋白^{[ 39]}。其它研究者也发现,GroEL在对人及牛的感染中是一种重要的毒力因子,可与受布氏菌感染的人、牛及绵羊的血清反应^{[21-22, 40]}。但该蛋白进化中具有较高的保守性,因此单独将此作为诊断靶点,可能影响诊断的特异性。

综上所述,由于布鲁氏菌是革兰氏阴性菌,存在O特异性抗原,因此LPS仍然是布鲁氏菌病诊断的最为重要的靶点,只是在做出诊断结论时要充分考虑交叉反应的问题,可以结合临床症状与排除试验加以确认。布鲁氏菌蛋白为靶点的诊断是布病诊断的重要补充,是发展特异性诊断的努力方向。在蛋白靶点中外膜蛋白更是重点,而其它蛋白则又是补充。外膜蛋白中,从目前国内外研究进展看,BP26为首选靶点,BCSP₃₁次之,后续为OMP25,OMP10,OMP31,其中OMP25与OMP31各一布鲁氏菌的一个生物型中缺失。当然由于同一蛋白不同研究者不同的实验条件,有些结果往往是相悖的,因此在研制诊断试剂时,全面的评价所有靶点,从中筛选实验所得的较好靶点进行进一步研究是比较可靠的途径。