2016-2018年巴西发生了黄热病的大规模暴发。新大陆灵长类动物间的流行是人类黄热病病毒传播的前哨事件。然而, 对于黄热病不同属的特异性和易感性的监测仍然知之甚少。在巴西国家黄热病监测项目的支持下, 我们获得并比较了巴西最近(2017年)黄热病暴发期间报告的93例人类病例和1 752例灵长类动物病例的流行病学、组织病理学、免疫组织化学和分子结果(见封底图1和图2)。我们分析了灵长类动物不同属之间与黄热病的相关性。吼猴属(Alouatta)是最可靠的哨点, 卷尾猴属(Sapajus)和伶猴属(青猴属)(Callicebus)的病毒载量较高, 但相对死亡率较低。尽管检测到病毒RNA, 真狨属(Callithrix)是最不敏感的, 表现出较低的病毒载量, 较低的相对死亡率, 没有明显的黄热病病毒抗原或肝脏的广泛损伤。这些易感性、病毒载量和死亡率的差异可应用于动物流行病学的战略监测和黄热病的控制措施。

我们研究了严重急性呼吸综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)感染的血清转化动力学。在2020年3月29日至5月22日期间, 我们收集了伦敦177名 SARS-CoV-2感染者的血清样本和相关临床数据。我们检测了SARS-CoV-2的 IgG抗体水平, 并与患者预后、人口统计学信息和实验室特征进行了比较。发现有2.0%~8.5%的人在感染后3~6周无血清转化。血清转化的人年龄较大, 更可能发生并发症, 并有较高水平的炎症标记物。非白种人的抗体浓度高于白种人, 且在随访期间浓度未下降。血清学检测结果与SARS-CoV-2感染的疾病预后、种族和其他危险因素相关。血清学检测可阐明人体感染SARS-CoV-2持续的时间和保护性。

核酸扩增试验检测严重急性呼吸综合症冠状病毒2可以以较低的成本增加检测的可用性。然而, 通过样品混合稀释对分析灵敏度的影响还没有得到很好的表征。我们利用3种核酸扩增技术检测了1 648份病毒标本: 实验室开发的针对包膜基因的实时逆转录 PCR 技术, 以及2种商用可读式Panther系统检测方法。8个样品混合检测与单独检测的阳性预测值(PPA)为71.7%~82.6%, 4个样品混合的阳性预测值PPA为82.9%~100.0%。我们建立并验证了一个独立的随机模拟模型, 用于估计稀释对阳性预测值(PPA)的影响和两阶段混合实时逆转录PCR检测算法的效率。结果显示阳性预测值(PPA)受到阳性结果比例、周期阈值分布、检测限值因素的影响。

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)是引起COVID-19的病原体, 已被证明能感染不同物种。对于许多物种来说, 家畜的作用和从事动物食品生产的人类相关风险仍然是未知的。确定家猪对SARS-CoV-2的易感性对于健康管理人畜共患病传播的潜在风险至关重要。我们发现猪经口腔、鼻腔接种SARS-CoV-2后易感。在16只动物中, 我们从2头猪的口腔和鼻腔冲洗液中检测到病毒RNA, 但仅从1头猪中分离到活病毒。只有2只猪在接种后的第11天和第13天检测到抗体, 但在接种后第6天的口腔液样本中检测到抗体。数据强调需要更多的其他家畜数据来评估家畜在SARS-CoV-2流行中的潜在作用。

我们在法国斯特拉斯堡调查了11对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)血清不一致的夫妇, 其特异性抗体和T细胞反应对SARS-CoV-2和人类冠状病毒(HCoV)229E和OC43的作用, 11对夫妇中1对夫妇确诊有轻度冠状病毒病(COVID-19)证据, 另10对为未暴露对照组。确诊COVID-19的病人被视为标示病人, 其伴侣为密切接触者。标示患者均表现为SARS-CoV-2特异性抗体阳性和T细胞反应, 持续时间长达症状出现后102天。所有接触者的SARS-CoV-2均呈阴性反应, 但有6人在伴侣出现症状后中位数7天内报告出现COVID-19症状, 其中4人出现3或4种SARS-CoV-2抗原的特异性T细胞反应呈阳性, 症状出现后持续93天。11对夫妇和对照组HCoV-229E或HCoV-OC43的T细胞反应呈阳性。数据表明, 暴露于SARS-CoV-2可以诱导无血清转换的病毒特异性T细胞反应。

我们调查了一组德国康复期的潜在献血者对SARS-CoV-2的免疫反应, 这些献血者均经PCR确诊为SARS-CoV-2感染。在症状出现60 d后, 有13/78(17%)的研究对象ELISA检测SARS-CoV-2 s1蛋白的IgG抗体呈临界或阴性结果。我们把有强抗体反应(比值> 3)的研究对象视为阳性组, 无SARS-CoV-2感染症状的志愿者视为阴性对照。利用干扰素联合免疫法, 观察到78%志愿者表现出对SARS-CoV-2的T细胞免疫反应, 与阳性组中T细胞免疫反应有相似比例(80%)。结果表明在恢复期患者中, 无SARS-CoV-2特异性IgG抗体的免疫反应可能是通过T细胞介导的。

图1

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	图1 三种吼猴属肝脏显微照片。黄热病的非典型表现。A和C罕见的凋亡细胞(箭头)分散在肝实质(苏木精和伊红染色, 原始放大倍数× 400)。 黄热病抗原(箭头)(轻度和多灶性免疫标记)免疫组织化学抗染色YF, 苏木精反染色。B原始放大倍数× 400。D、E原始放大倍数× 200轻度反应, 显示门脉区(* )(苏木精和伊红)有淋巴组织细胞浸润染色, 原始放大倍数× 200。F在小叶型肝叶内黄热病病毒抗原免疫标记 免疫组织化学染色抗YF, 苏木精反染色, 原始放大倍数× 400。

图2

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	图2 2例黄热病和阴性IHC患者器官显微照片及RT-qP CR阳性结果(不一致)。病人1。A肝脏显示中带状大囊和微囊脂肪变性(箭头)与轻度门静脉炎性浸润(苏木精和伊红染色, 原始放大倍数× 100)。B胰腺坏死, 血栓(* )(苏木精和伊红染色, 原始放大倍数× 100)。C肝脏显示阴性免疫标记黄色发热抗原(抗YF免疫组织化学染色, 苏木精反染色, 原放大倍数× 100)。 病人2。D肝脏显示坏死性肝炎, 伴有中度淋巴组织细胞浸润和轻度脂肪变性(箭头)(苏木精和伊红染色, 原始放大性× 200)。E肝脏显示坏死性肝炎, 有导管反应和轻度脂肪变性(箭头)。F显示肝脏对YF抗原呈阴性免疫标记(免疫组化染色抗YF, 苏木精反染色)。